[发明专利]创伤弧菌等温扩增引物、探针、试剂盒与检测方法

说明书

本发明公开了一种创伤弧菌等温扩增引物，包括上游引物和下游引物；所述上游引物的序列为SEQ ID NO：1；所述下游引物的序列为SEQ ID NO：2。本发明属于生物检测技术领域，本发明提供的引物和探针特异性好，提供的试剂盒通过靶向捕获探针，特异富集目标序列，能够提高特异性；同时，捕获探针中含有T7启动子序列，通过转录及逆转录反应，放大待测序列，能够大大提高检测灵敏度，操作简便快捷，能够解决复杂样本背景对重组酶等温扩增抑制的问题，解决重组酶等温扩增的实际应用问题，具有广泛的应用场景。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及创伤弧菌等温扩增引物、探针、试剂盒与检测方法。

背景技术

创伤弧菌(vibrio vulnificus)是普遍生存在海洋中的一种细菌，一旦感染，发病急，病情发展很快，与霍乱弧菌、肠炎弧菌并列为造成人类感染疾病的三大弧菌。接触创伤弧菌污染的海产或海水，或遭海生鱼贝类等刺伤，都可能导致创伤弧菌进入人体并发生感染。感染创伤弧菌后的症状包括呕吐、发烧、腹泻、低血压、肿胀和疼痛等，临床上容易造成严重的败血症及肢体坏死，需要尽快使用抗生素治疗。

等温扩增技术又称为恒温扩增技术，可在恒定温度下扩增特定的DNA或RNA片段。与常规PCR扩增技术相比，等温扩增技术对仪器要求低、反应时间短，更能满足POCT快速实时检测的要求。现有等温扩增技术主要包括环介导等温扩增(LAMP)、依赖于核酸序列扩增技术(NASBA)、滚环扩增技术(RCA)、解旋酶等温扩增技术(HAD)等，在食品安全和公共卫生防疫等领域得到广泛的应用。等温扩增技术虽具有许多优点，但由于样品背景的复杂性，容易对重组酶等温扩增产生抑制作用，导致重组酶等温扩增等技术在实际应用中受到限制。

感染创伤弧菌的危害大，现有技术尚无法对创伤弧菌进行快速、高效检测，因此，提供创伤弧菌等温扩增引物、探针、试剂盒与检测方法具有重要意义。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种创伤弧菌等温扩增引物、探针、试剂盒与检测方法，提供的引物和探针特异性好，结合重组酶等温扩增技术实现了对创伤弧菌的快速、高效检测。此外，本发明提供的试剂盒通过靶向捕获探针，特异富集目标序列，能够提高特异性；同时，捕获探针中含有T7启动子序列，通过转录及逆转录反应，放大待测序列，能够大大提高检测灵敏度，操作简便快捷，能够解决复杂样本背景对重组酶等温扩增抑制的问题，解决重组酶等温扩增的实际应用问题，具有广泛的应用场景。

本发明的目的将通过下面的详细描述来进一步说明。

本发明提供创伤弧菌等温扩增引物，包括上游引物和下游引物；所述上游引物(引物F)的序列为CACCGCCGCTCACTGGGGCAGTGGCTGGGTAT(SEQ ID NO：1)；所述下游引物(引物R)的序列为CGATAGTTGAGTTTCACGCCCATCTCGAAATCCG(SEQ ID NO：2)。

本发明还提供创伤弧菌等温扩增探针，所述探针用于检测权利要求1所述创伤弧菌等温扩增引物的扩增产物，其序列由TCTTATTCCAACTTCAAACCGAACTATGACGTTGACGAAGCGCCTGTG(SEQ ID NO：3)修饰得到，修饰后的探针序列为：TCTTATTCCAACTTCAAACCGAACTATGACGT/i6FAMdT/T/idSp/G/iBHQ1dT/ACGAAGCGCCTGTG C3 Spacer。

此外，创伤弧菌等温扩增试剂盒，其特征在于：包括所述创伤弧菌等温扩增引物、所述创伤弧菌等温扩增探针。

优选地，所述创伤弧菌等温扩增引物的浓度为5～20μmol/L，所述创伤弧菌等温扩增探针的浓度为5～20μmol/L。

优选地，所述创伤弧菌等温扩增试剂盒，还包括捕获磁珠、扩增反应液和重组酶。