[发明专利]适用于脑膜炎球菌及肺炎球菌的冻干保护剂

说明书

本发明涉及微生物领域，具体而言，涉及一种适用于脑膜炎球菌及肺炎球菌的冻干保护剂，以质量百分数计，其在工作浓度下由如下活性成分组成的溶液：脱脂乳粉8％～13％、蔗糖8％～13％、抗环血酸和/或其盐0.3％～1％。上述成分互相配合，能够有效提高冷冻干燥后的脑膜炎球菌及肺炎球菌的活菌率。

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体而言，涉及一种适用于脑膜炎球菌及肺炎球菌的冻干保护剂。

背景技术

微生物个体微小，代谢活跃，生长繁殖块，如果保存不妥容易发生变异，或被其他微生物污染，甚至导致细胞死亡。因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。目前微生物保藏技术主要分为四类：冷冻法、干燥法、传代法和冷冻干燥法，其原理主要是运用隔绝空气、低温和干燥的手段，使微生物的代谢处于最不活跃状态，其生命活动始终处于半永久性的休眠状态，以达到保藏的目的。当今公认的最安全、最可靠的并且能够长期保存微生物的方法是真空冷冻干燥法，该方法适用于大多数微生物的保藏。真空冷冻干燥法保藏适用范围广，只有一些不产孢子只产菌丝体的真菌不适合采用外该方法外，其它微生物如病毒、细菌等均能采用该方法。真空冷冻干燥法基本原理是在低温下微生物用冻干保护剂混合并冻结至共晶点以下，冰晶在适当的真空环境中升华干燥，然后再进行解吸干燥，部分结合水会被除去，最终得到干燥的微生物产品，对其进行真空熔封，最后在低温及避光环境下保藏。

冻干保护剂分为了小分子冻干保护剂(如缓冲盐类、醇类和低聚糖类)以及大分子冻干保护剂(如多糖类、多肽类和蛋白质类)。小分子冻干保护剂，分子结构中含有氢键，并且具有很强的亲水性，在冷冻及干燥过程中，可与微生物的蛋白质极性基团或细胞膜磷脂中的磷酸基团形成氢键，从而保护细胞膜和蛋白质功能与结构的完整性。然而大分子冻干保护剂“包裹”保护微生物菌体本生，并且促进了低分子冻干保护剂的发挥。保护剂类型的选择取决于微生物的生物学特性，蔗糖、血清、脱脂牛乳等既是很好的低温保护剂又是有效的冻干保护剂。

目前，很少有适用于脑膜炎球菌及肺炎球菌的冻干保护剂的研究，大多数的冻干保护剂还是适用于传统的微生物。因此，如何提高脑膜炎球菌及肺炎球菌冻干后的保存时间、存活率及稳定性等指标，以获得更高的综合性能的菌种来满足大规模的发酵生产需求是亟待解决的问题。

发明内容

为了克服现有技术中的上述问题，本发明提供了一种适用于脑膜炎球菌及肺炎球菌的冻干保护剂，其活性成分为脱脂乳粉、蔗糖和抗环血酸和/或其盐。

本发明提供了冻干保护剂的组合，其在冷冻干燥(例如真空冷冻干燥)时获得脑膜炎球菌和/或肺炎球菌的高存活率。为了最大限度地提高存活率，在冷冻干燥前将冷冻干燥保护剂组合物添加到细菌中。具体地，本发明还涉及冻干保护剂的用途，其用于增加经冷冻干燥后的细菌的存活力，以及改善冷冻干燥细菌在低温下的长期稳定性。

本发明的第一方面涉及一种冻干保护剂，以质量百分数计，其在工作浓度下由如下活性成分组成的溶液：

脱脂乳粉8％～13％、蔗糖8％～13％、抗环血酸和/或其盐0.3％～1％。

可选的，如上所述的冻干保护剂，以质量百分数计，其在工作浓度下由如下活性成分组成的溶液：

脱脂乳粉9％～12％、蔗糖9％～12％、抗环血酸和/或其盐0.5％～0.8％。

可选的，如上所述的冻干保护剂，以质量百分数计，其在工作浓度下由如下活性成分组成的溶液：

脱脂乳粉9％～11％、蔗糖9％～11％、抗环血酸和/或其盐0.5％～0.7％。

可选的，如上所述的冻干保护剂，所述抗环血酸盐为L-抗坏血酸钠。

可选的，如上所述的冻干保护剂，所述溶液的溶剂为水。

根据本发明的第二方面，还涉及如上所述的冻干保护剂的制备方法，包括：