[发明专利]一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法

说明书

本发明公开了一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法，包括如下步骤：精确称量一定量的待测量兽用维生素ADE注射液，用无水乙醇稀释后，再用微孔滤膜过滤，制成供试品溶液；精确称取适量的维生素A棕榈酸酯对照品、维生素D₃对照品和维生素E乙酸酯对照品，用无水乙醇配制成对照品溶液；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以乙腈‑乙醇‑水为流动相B，分别取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪进行梯度洗脱，并记录色谱图；根据色谱图，并按照计算公式计算维生素含量。该方法专属性和针对性强，稳定性高，能有效分离维生素A、维生素D3和维生素E，并对其含量进行测定，且操作简单、测量结果较精准。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，特别涉及一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法。

背景技术

维生素A作为组成视紫红质素的物质、骨骼发育所必需的营养物、机体皮肤和黏膜上皮细胞正常结构与功能的维持物质，缺乏后会引起视觉、生长发育、呼吸、消化和繁殖力的紊乱。维生素D₃主要调节体内钙磷代谢，对维持钙磷平衡、骨骼发育、肌肉神经传导效应以及细胞活动信息传递等生命过程具有重要意义，缺乏后会出现佝偻病、骨质软化等症状。维生素E具有保护脂质中的多不饱和脂肪酸免受氧化损伤、促进垂体促性腺激素分泌、稳定细胞膜和改善脂质代谢等作用，缺乏后会出现免疫力下降、代谢失常、溶血、机体衰老、流产、胚胎发育异常和死胎等症状。

迄今为止，维生素ADE注射液主要用于预防及治疗维生素ADE的缺乏症。目前，测定维生素ADE注射液中的脂溶性维生素A、维生素D₃和维生素E的方法主要有分光光度法和HPLC法；其中，分光光度法是通过测定吸收度而确定样品含量，因样品中的辅料会对吸收度造成干扰而影响含量检测，须经过皂化和提取等预处理过程后再进行检测；传统的HPLC法具有灵敏度高、操作简单和重现性好等特点，但是样品同样需经过繁琐的预处理过程后，方能进行含量检测。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法，该方法专属性和针对性强，稳定性高，能有效分离维生素A、维生素D₃和维生素E，并对其含量进行测定，且操作简单，测量结果较精准。

为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：

一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法，包括如下步骤：

(1)配制供试品溶液

精确称量一定量的待测量兽用维生素ADE注射液，用无水乙醇稀释后，再用微孔滤膜过滤，制成供试品溶液；

(2)配制对照品溶液

精确称取适量的维生素A棕榈酸酯对照品、维生素D₃对照品和维生素E乙酸酯对照品，用无水乙醇配制成对照品溶液；

(3)高效液相色谱检测

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以乙腈-乙醇-水为流动相B，分别取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪进行梯度洗脱，并记录色谱图；

(4)维生素含量计算

根据步骤(3)得到的色谱图，并按照计算公式(1)计算维生素含量，

式中，A_X为供试品溶液中相应维生素的峰面积，A_R为对照品溶液中相应维生素的峰面积，C_X为供试品溶液中相应维生素浓度，C_R为对照品溶液中相应维生素浓度，R％为对照品溶液中各相应维生素含量。

进一步的，该方法还设计了维生素A定位对照液、维生素D₃定位对照液、维生素E定位对照液以及不含主成分的阴性对照液。