[发明专利]磷酸化扁藻胞外多糖及其制备方法

说明书

本发明公开了一种磷酸化扁藻胞外多糖及其制备方法，其中磷酸化扁藻胞外多糖的制备方法包括以下步骤：将扁藻胞外多糖与磷酸化试剂和硫酸钠在一定pH条件下，加热反应一段时间，进行磷酸化分子修饰，以产物的磷酸根含量为指标，以试剂配比、反应温度、反应pH值、反应时间为因素，用正交试验优选出扁藻胞外多糖磷酸化修饰的最佳条件。本发明技术方案能够实现工业化生产，且能够提高产率。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，涉及一种磷酸化扁藻胞外多糖及其制备方法。

背景技术

根据现代科学研究，多糖是生物体内一类重要的大分子物质，具有多种生物活性，如抗氧化、抗病毒、抗菌、抗肿瘤等药理活性。而纯净扁藻培养液的主要成分正是多糖，且扁藻适应性强，生长繁殖迅速，是极易培养的藻种之一。有研究证明藻类的多糖可以存在调节免疫细胞活性及肿瘤细胞生长的作用。然而，提取获得的天然多糖生物活性普遍较低，且水溶性并不好，不易对其进行深入的药理研究及其临床制剂应用研究。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种磷酸化扁藻胞外多糖的制备方法，旨在以扁藻作为原料生产磷酸化扁藻胞外多糖，同时通过新的磷酸化修饰技术提高产率。

为了实现上述技术目的，本发明的技术方案是：

一种磷酸化扁藻胞外多糖的制备方法，该方法包括以下步骤：

将三聚磷酸钠和三偏磷酸钠与水按照预置比例溶解制得磷酸化试剂；

在所述磷酸化试剂中加入扁藻胞外多糖PEPs，制得扁藻胞外多糖溶液；

在所述扁藻胞外多糖溶液中加入催化剂，加热进行磷酸化反应制得混合溶液，并调节混合溶液的PH值直至其达到目标PH值，制得半成品溶液；

将半成品溶液依次进行透析、冻干，从而制得磷酸化扁藻胞外多糖pPEPs。

优选地，所述磷酸化试剂中三聚磷酸钠与三偏磷酸钠两者质量比为4∶3、5∶2或6∶1；所述催化剂为硫酸钠。

优选地，所述混合溶液的目标PH值8至10。

优选地，所述磷酸化反应的反应时间为4小时至8小时，反应温度为80℃至100℃。

优选地，在将半成品溶液进行透析干燥之前还包括：

在所述半成品溶液中加入2-3倍体积的95％乙醇溶液；

将半成品溶液与乙醇溶液离心混合后置于45±3℃的环境下2～3小时，以去除残留的乙醇，得到醇沉多糖。

优选地，将半成品溶液进行透析的步骤包括：

将所述醇沉多糖冷冻干燥，再加入超纯水，在50℃下水浴复溶，置于截留分子量为800-1200的透析袋，透析24h以上，透析1次以上，收集截留液，制得磷酸化扁藻胞外多糖溶液。

优选地，将半成品溶液进行冻干的步骤包括：将所述磷酸化扁藻胞外多糖溶液真空冷冻干燥，制得磷酸化扁藻胞外多糖。

优选地，磷酸化试剂为三聚磷酸钠和三偏磷酸钠按质量比6∶1与水混合而成，所述混合溶液PH为8，所述反应温度为100℃，反应时间为6小时。

本发明还提供一种磷酸化扁藻胞外多糖，其由前述制备方法制备得到。