[发明专利]一种玉米自交系成熟种子幼苗茎节遗传转化直接成苗的方法

权利要求书

1.一种玉米自交系成熟种子幼苗茎节遗传转化直接成苗的方法，其特征在于，包括以下步骤；

步骤一：选取外植体材料，玉米成熟种子幼苗茎节，将其置于70％浓度乙醚中，清洗2-3遍，然后在无菌环境下，通过器械在幼苗茎节上划上与茎节纹理垂直的伤口；

步骤二：将处理完成后的幼苗茎节放置在培养皿中，保持环境温度在20-28℃，在黑暗环境下静置2-3天，幼苗茎节伤口处出现愈伤组织；

步骤三：对幼苗茎节进行挑选，观察表面是否出现破损，茎节培养是否正常，将其放置在培养基中，培养基底层垫一层试纸，将携带有目的基因载体的农杆菌置入其中，与幼苗茎节共培养3-5天；

步骤四：将幼苗茎节取出置入筛选培养基中，筛选12d，重复筛选5-8次；

步骤五：将幼苗茎节从筛选培养基取出，置于培养基中并在室温昏暗环境下培养10-12天，有新芽萌动后，转到基础培养基中，在室温和12h光照条件下，分化出芽。

2.根据权利要求1所述的一种玉米自交系成熟种子幼苗茎节遗传转化直接成苗的方法，其特征在于，所述步骤一中幼苗茎节上伤口大小控制在1-3mm。

3.根据权利要求1所述的一种玉米自交系成熟种子幼苗茎节遗传转化直接成苗的方法，其特征在于，所述步骤三中幼苗茎节伤口处紧挨试纸放置。

4.根据权利要求1所述的一种玉米自交系成熟种子幼苗茎节遗传转化直接成苗的方法，其特征在于，所述步骤四中筛选培养基包括终浓度为3-5mg/L的草丁膦和终浓度为160-175mg/L的特美汀。

5.根据权利要求1所述的一种玉米自交系成熟种子幼苗茎节遗传转化直接成苗的方法，其特征在于，所述步骤三中培养基成分包括MS基本培养基+15g/L葡萄糖+15g/L麦芽糖+0.2g/L脯氨酸+0.6g/L水解酪蛋白+2～5mg/L噻二唑苯基脲+0.5～1mg/L 2,4-D，琼脂6.5g/L。