[发明专利]一种抗血小板抗体检测信号制剂的制备方法、抗血小板抗体检测信号制剂及应用

说明书

本发明涉及医药制剂技术领域，尤其是涉及一种抗血小板抗体检测信号制剂的制备方法、抗血小板抗体检测信号制剂及应用，所述制备方法包括，取配方量的均匀包被了单克隆抗人IgG抗体的肉眼可辨颜色的微球或微粒和复合稳定剂，用PBS溶液均匀溶解得到检测信号制剂。本发明提供的抗血小板抗体检测信号制剂的制备方法，采用肉眼可辨颜色的微球代替红细胞，在复合稳定剂的作用下，能够大大地延长保存时间，实现了与检测产品的其他组分同步购买、储藏和使用，其稳定保存周期可达一年以上，为抗血小板抗体检测产品的生产和运输过程都提供了极大的方便。

技术领域

本发明涉及医药制剂技术领域，尤其是涉及一种抗血小板抗体检测信号制剂的制备方法、抗血小板抗体检测信号制剂及应用。

背景技术

血小板输注可用于预防和治疗血小板数量减少或功能缺失患者的出血症状，恢复和维持人体的正常止血和凝血功能。然而，长期的血小板输注可能带来血小板输注无效的严重后果，即连续两次输注足量血小板，患者临床出血症状未见改善，血小板计数未见明显增高。血小板抗原经输血、妊娠及骨髓移植等可刺激机体产生抗血小板抗体致敏血小板并使其破坏，引起血小板减少，导致患者出现瘀点、瘀斑、出血甚至死亡等严重后果。HLA致敏是最常见的血小板输注无效的免疫因素。因此，检测患者是否有抗血小板抗体，可辅助临床采取恰当的预防和治疗措施，特别是能为抗血小板抗体阳性患者进行交叉配型，以筛选血小板相容性供者，可显著减少血小板输注无效症的发生。

抗血小板抗体检测试剂盒为各大医院、血站输血科提供了一个简易、快捷的方法来检测患者血清中是否有抗血小板抗体，可辅助临床采取恰当的预防和治疗措施，特别是能为抗血小板抗体阳性患者进行交叉配型以筛选血小板相容性供者，从而预防血小板输注无效。目前国内外抗血小板抗体检测注要有免疫细胞化学法、微柱凝胶法及固相凝集法三种。免疫细胞化学法由于需要专用仪器、繁琐、耗时，不适于基层开展，微柱凝胶法容易造成结果误差，而固相凝集法因灵敏度，特异性高而前景较好。

检测抗血小板抗体现在商品化的试剂有ELISA类如GTI公司的MACE(筛查并区分HLA+HPA)，PAKAUTO(检测自身抗体)，PAK12(鉴定HPA特异性)；固相红细胞吸附类试剂如Immucor公司的capture P(筛查血小板抗体)，荷兰Sanquin试剂MASPAT(筛查抗体)；免疫荧光技术如Onelambda公司的流式磁珠试剂FlowPRA(可鉴定HLA抗体特异性)。

Capture P检测原理：Capture P是一种固相微孔板系统，通过血小板与其抗体之间的免疫反应来检测血清或血浆中的抗血小板抗体。微孔板上预先包被有抗血小板单克隆抗体，加入血小板悬液后，通过离心将血小板固定在微孔上，再将低离子强度的缓冲液和患者血清加入到孔内，让血清中的抗体与固定的血小板层充分结合，孵育后洗去未结合的血清，再加入鼠抗人IgG单克隆抗体致敏的红细胞来检测与血小板结合的抗体。当患者血清中抗血小板抗体为阳性时，指示红细胞结合到血小板单层上的IgG抗体上，则显示阳性反应。因此，阳性反应的特点是指示红细胞平铺在反应孔底部表面，而阴性反应是指示红细胞聚集在孔底部中央形成细胞扣。

MASPAT检测原理：抗血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)的检测原理是基于抗原/抗体反应的固相凝集技术。供者血小板通过离心固定在包被有血小板特异性鼠单克隆抗体的微孔内表面，加入1×PBST清洗液洗去未结合的血小板形成血小板单细胞层。将患者血清和LISS(低离子强度溶液)加入相应的微孔中孵育，使患者血清中的抗体与固定的血小板单细胞层结合。孵育结束后，再加入清洗液洗去未结合或非特异性结合的抗体。加入抗人IgG(桥接抗体)和人IgG致敏红细胞后，通过离心微孔板的方法检测样本中与血小板结合的抗体。通过抗血小板抗体检测用指示红细胞(固相凝集法)在微孔中的状态可直接肉眼观察得出抗血小板抗体检测的结果。阳性反应的特点是指示红细胞平铺在反应孔底部表面，而阴性反应是指示红细胞聚集在孔底部中央。