[发明专利]一种检测猫上呼吸道疾病病原体的核酸组合物、试剂盒以及方法

说明书

本发明公开了一种检测猫上呼吸道疾病病原体的核酸组合物、试剂盒以及方法，涉及分子生物技术体外诊断领域。该核酸组合物既可以实现其中一种的病原体的检测，也可以实现猫上呼吸道疾病多重病原体的同时检测。该核酸组合物具有检测特异性好，灵敏度高的优点。本发明还提供了一种检测试剂盒及检验方法，使用本发明提供的方法进行检测时，无需开盖，且无污染，检测方法方便快捷。本发明为猫呼吸道疾病的临床诊断提供了快速准确地检测方法。

技术领域

本发明涉及分子生物技术体外诊断领域，具体而言，涉及一种检测猫上呼吸道疾病病原体的核酸组合物、试剂盒以及方法。

背景技术

猫上呼吸道疾病(Feline upper respiratory tract disease,URTD)是猫常见的临床疾病，以呼吸道粘膜发生炎症为主要特征，发病率高。URTD常见的病原有5种，包括猫疱疹1型病毒、猫杯状病毒、猫支原体、猫衣原体和支气管败血波氏杆菌。

尽管猫三联疫苗已在世界范围内被广泛使用，但猫疱疹1型病毒(FelineHerpesvirus typeⅠ，FHV-1)与猫杯状病毒(Feline Calicivirus，FCV)仍是引起猫上呼吸道疾病的主要病因。在猫舍、收养所等饲养密度高的地方更易发生猫疱疹病毒及猫杯状病毒的感染。猫疱疹病毒及猫杯状病毒可引起猫的鼻炎、结膜炎、口腔炎症等，或伴有肺炎、发热等症状。另外猫杯状病毒的感染还能导致恶性系统性猫杯状病毒病，死亡率较高。猫支原体(Mycoplasma felis，M.felis)，又称为猫霉形体；猫衣原体(Chlamydophila felis，C.felis)，又称猫披衣菌；这两种病原临床表现为结膜炎、大量眼鼻分泌物、打喷嚏、气促等，后期可能会转化为化脓性肺炎。支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica，Bb)感染猫后，临床症状是非特异性的，从打喷嚏和流涕等轻微症状到肺炎等严重症状不等，总发病率为0％-30％。

因此，引发猫上呼吸道疾病的几种病原体的临床症状相似度较高，且常出现多重病原共同感染的情况，在临床诊断中需要区分病原体时难度较大。

目前临床常用的诊断方法有免疫荧光抗体检测、血清抗体滴度、病毒分离或细菌培养等技术，但存在检测周期长、灵敏度低、检测病原单一等缺点。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测猫上呼吸道疾病病原体的核酸组合物、试剂盒以及方法以解决上述技术问题。

近两年PCR检测开始广泛应用于宠物体外诊断中，是行业内公认的一种快速、灵敏度高、特异性好的诊断方法。实时荧光定量PCR的原理为：在PCR扩增过程中，病原体的引物探针与靶核酸特异性地结合，然后模板-引物的结合物在聚合酶、dNTP等的作用下开始进行互补链的延伸，同时聚合酶的外切活性将探针上的荧光基团剪切下来，使其远离于探针另一端的淬灭基团，发出荧光。由此使得荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步，进而通过仪器进行实时监控。如果对不同靶标的探针标记不同检测通道的荧光报告基团，则可实现同时对多种靶标进行核酸检测。

基于目前市面上较少同时检测猫呼吸道多重病原体的实时荧光定量PCR试剂盒及快速进行病原体分析的方法。本发明提供了一种检测猫上呼吸道疾病病原体的核酸组合物、试剂盒以及方法，该多重实时荧光PCR检测兼具PCR检测的优点，可实现快速准确地同时检测引起猫呼吸道疾病的多重病原体，对猫呼吸道疾病的临床诊断及治疗有着重要的意义。

此外，也可以单独使用其中一组核酸组合物实现特异性的单一病原体的检出。

本发明是这样实现的：

一种检测猫上呼吸道疾病病原体的核酸组合物，其包括如下至少一种的核酸组合：

用于检测猫疱疹1型病毒的第一核酸组合、用于检测猫杯状病毒的第二核酸组合、用于检测猫支原体的第三核酸组合、用于检测猫衣原体的第四核酸组合和用于检测支气管败血波氏杆菌的第五核酸组合；