[发明专利]一种β-烟酰胺单核苷酸的检测方法

说明书

本发明公开了一种β‑烟酰胺单核苷酸的检测方法，包括以下步骤：(1)色谱条件：色谱柱：填料为氨基键合硅胶；流动相：由无机相和有机相混合得到；检测波长：190～280nm；检测流速：0.8～1.2ml/min；柱温：25～35℃；(2)配制供试样品和对照样品：称取β‑烟酰胺单核苷酸标准样品作为对照样品，称取β‑烟酰胺单核苷酸结晶样品作为供试样品，用流动相溶解定容；(3)测定方法：将对照样品溶液和供试样品溶液过滤后，注入高效液相色谱仪，记录色谱图并计算峰面积。本发明检测方法不易与其它物质重合，分离度较高；在较广范围内线性关系良好，适于NMN精确定量；直接上样，操作简单方便，节省时间；成本较低。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种β-烟酰胺单核苷酸的检测方法。

背景技术

β-烟酰胺单核苷酸，简称NMN，分子量334.22，分子式C₁₁H₁₅N₂O₈P， 结构如下：

NMN作为前体可用于合成人体代谢必不可少的辅酶I(烟酰胺腺嘌呤二 核苷酸，NAD)。研究表明，其对人体细胞修复，减缓衰老有重要作用。近 年来，Nature、Cell等顶级期刊刊登了多篇NMN功效研究的文章，哈佛大学 实验证实补充NMN可将哺乳动物寿命延长30％以上，日本美国等几所大学 及企业已相继开展了临床试验，NMN被看作是“长生不老药”，倍受保健品 药品市场的追捧。近期NMN市场前景良好，但市面上销售的NMN原料以及相关终端产品多种多样，质量参差不齐。而其检测方法较少，且没有统一标 准。

高效液相色谱(HPLC)法分析速度快、重复性高，因此药典中测定物质 含量多采用此法。按固定相和流动相的极性不同，HPLC可分为正相色谱法和 反相色谱法。其中，反向色谱法中非极性固定相C18应用最为广泛。目前， NMN检测多使用C18色谱柱，为延长其保留时间，流动相多加入四丁基季铵 盐，如四丁基氢氧化铵或四丁基溴化铵等。但是NMN在上述条件下保留时间 依然短暂，通常在3分钟以内，易与其它物质重叠，分离度较低。

因此，急需设计一种针对NMN更有效的分析检测方法已解决上述技术难 题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种β-烟酰胺单核苷酸的检测方法， 其克服了现有技术的上述缺陷，能够快速、稳定、准确地检测β-烟酰胺单核 苷酸(NMN)含量及相关杂质量。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种β-烟酰胺单核苷酸的检测方法，包括以下步骤：

(1)色谱条件：

色谱柱：填料为氨基键合硅胶；

流动相：由无机相和有机相混合得到，无机相为水或磷酸盐缓冲液，有 机相为甲醇；

检测波长：190～280nm；

检测流速：0.8～1.2ml/min；

进样量：10～20μl；

柱温：25～35℃；

(2)配制供试样品和对照样品：称取β-烟酰胺单核苷酸标准样品作为对 照样品，称取β-烟酰胺单核苷酸结晶样品作为供试样品，用流动相溶解定容；

(3)测定方法：将对照样品溶液和供试样品溶液过滤后，注入高效液相 色谱仪，记录色谱图并计算峰面积。

优选地，上述技术方案中，所述步骤(1)中，无机相和有机相的体积比 为50:50～95:5，等度洗脱。

优选地，上述技术方案中，所述步骤(1)中，磷酸盐缓冲液的浓度为0～20 mM，pH值4～7。