[实用新型]鸡ALKBH5基因荧光定量RT-PCR试剂盒

说明书

本实用新型属于生物技术领域，具体公开了一种鸡ALKBH5基因荧光定量RT‑PCR试剂盒，包括盒体、盖体，盒体内设有SYBR Green Master热启动荧光PCR混合物、鸡ALKBH5基因表达的特异性正反向引物、鸡内参基因GAPDH表达的特异性正反向引物、ROX染料、灭菌DEPC水、Dilution buffer。本实用新型试剂盒通过实时荧光定量RT‑PCR技术检测鸡ALKBH5基因表达。

技术领域

本实用新型属于生物技术领域，尤其涉及鸡ALKBH5基因表达荧光定量RT-PCR试剂盒及检测方法，主要用于鸡ALKBH5基因在肌肉和肝脏代谢、生长、分化中的作用机理研究。

背景技术

表观遗传学是指在基因序列不发生变化的情况下，基因的表达水平发生改变，如DNA、 RNA和蛋白质的化学修饰都是表观遗传学重要的研究内容，近年来，随着科学技术的快速发展，基于DNA和蛋白质修饰研究基础，RNA甲基化研究在表观遗传领域已成为前沿的研究热点。在众多的RNA化学修饰中，RNA甲基化修饰约占所有RNA修饰的60％以上，其中N-甲基腺嘌呤(N6－methyladenosine，m6A)是真核生物mRNA和lncRNAs最常见转录后修饰，近年来以m6 A为主的RNA甲基化修饰研究表明，m6A与基因表达调控以及RNA 的转录、翻译、剪切、降解、核转运等方面密切相关。m6A甲基化的形成需借助甲基化转移酶的作用将甲基供体SAM提供的－CH3转移到RNA分子特定的腺嘌呤上，去甲基化需要去甲基化酶和结合蛋白质的作用脱去－CH3而实现。m6A甲基化修饰在细胞内是动态的可逆的修饰过程。

ALKBH5基因主要参与m6A甲基化修饰的去甲基化过程。研究发现，ALKBH5基因在小鼠睾丸中的表达水平最高，敲除后会导致m6A水平上升，导致精子形态发生异常，睾丸体积变小以及一系列的生殖功能障。在小鼠小脑发育过程中，Alkbh5基因的缺失会导致不同细胞中的关键基因m6A修饰发生紊乱，导致小脑细胞增殖和分化异常。在胶质母细胞瘤干样细胞(GSCs)中，沉默ALKBH5的表达可抑制GSCs的增殖。在人上皮性卵巢癌组织中ALKBH5 的表达与正常卵巢组织相比，显著增加。以上的这些研究，大多数是以人或小鼠为模型，共同揭示了ALKBH5在调控动物繁殖、组织生长发育中具有重要作用，在一些重要的经济动物，如鸡上的研究均相对较少。在现代规模化养殖生产中，提高动物的生产性能和繁殖性能对于提高经济效益极为重要，因此就可以从RNA甲基化修饰的分子调控机制研究入手，进而通过有效的改变RNA分子甲基化修饰的水平来影响鸡的生产性能，产生更多的经济效益。

实用新型内容

为了解决以上技术问题，本实用新型提供一种鸡ALKBH5基因表达荧光定量RT-PCR检测试剂盒，本实用新型试剂盒通过实时荧光定量RT-PCR技术检测鸡ALKBH5基因表达，为研究鸡ALKBH5表达调控以及生长发育调控奠定基础，为优质鸡育种提供理论依据，具有潜在的应用价值。

本实用新型的目的是通过以下技术方案实现的，鸡ALKBH5基因荧光定量RT-PCR试剂盒，包括盒体和盖体，盒体内设有衬垫，衬垫上设有容纳腔，其特征是，所述容纳腔中分别设置SYBR Green Master热启动荧光PCR混合物、鸡ALKBH5基因表达的特异性正反向引物、鸡内参基因GAPDH表达的特异性正反向引物、ROX染料、灭菌DEPC水、稀释缓冲液 Dilutionbuffer。

其中，鸡ALKBH5基因正反向引物序列为：

F:5，—TCGTTCTTCAGCGATTCGGC—3，

R:5，—TCGGCTGCGTATCCACTGAG—3；

以及鸡内参基因GAPDH表达的特异性正反向引物序列为:

F:5，—CGATCTGAACTACATGGTTTAC—3，

R:5,—TCTGCCCATTTGATGTTGC—3。