[实用新型]微流控过滤芯片

说明书

本实用新型属于核酸检测技术领域，涉及用于核酸检测的微流控芯片。微流控过滤芯片，该芯片从上到下依次包括加样层、过滤层、检测层；其中，所述加样层上设有第一微腔；所述过滤层上与所述第一微腔对应的位置设有过滤膜；所述检测层上与所述过滤膜对应的位置设有第二微腔；进入所述第一微腔中的混合物在驱动力的作用下经过所述过滤膜进入所述第二微腔中，实现固液分离。本实用新型通过将比色反应后的AuNPs溶液利用该芯片进行过滤分离，随着miRNA浓度的升高，形成的双链增加，吸附在AuNPs表面的DNA探针减少，停留在滤膜上与DNA探针结合的荧光基团的拉曼光谱强度降低；溶液中游离的双链的荧光强度也会越来越高，结合比色结果，进行三重验证，提高检测的准确性。

技术领域

本实用新型属于核酸检测技术领域，涉及用于核酸检测的微流控芯片。

背景技术

近年来，研究者们陆续发现miRNA在癌症早期表达发生异常，作为一种新型的肿瘤标志物受到越来越多的关注。传统的miRNA检测手段例如Northern blot，PCR和微阵列等。这些方法需要转录和扩增，检测步骤繁琐，费时且费力。

为了对miRNA进行绝对或相对定量检测，现有技术中已经通过使用比色法、荧光、SERS，电化学和表面等离振子共振作为检测平台，开发了许多新颖的传感方法。其中，比色法简单，成本低，易于操作并且可以直观地监视信号变化，因此备受关注。由于AuNPs聚集时其可见的颜色变化，独特的光学特性和高比表面积，因此被广泛用于比色传感器的制备。当该传感器用于核酸检测时，DNA跟AuNPs依靠正负电荷吸附原理被吸附在AuNPs表面，可以使AuNPs抵抗盐诱导的聚集。在存在miRNA的情况下，DNA探针往往会与miRNA杂交形成双链。双链刚性结构构象使它们与AuNPs保持一定距离，致使脱离DNA保护的AuNPs在盐溶液中被诱导聚集。因此AuNPs的吸光度依赖于miRNA浓度而变化。

然而，实际检测样本的组成成分很复杂，不同的物质都有可能诱导AuNPs吸光度发生变化，导致检测结果的准确性不高。为了对miRNA进行更加准确的定量检测，需要排除一些干扰物质的影响。

现有技术中，关于提高AuNPs比色法检测准确性的相关措施和解决手段鲜有报道。因此，如何解决AuNPs比色法对miRNA定量检测的准确性问题是需要关注的焦点。

实用新型内容

本实用新型的目的是解决现有AuNPs比色法检测准确性不高的问题，提供一种基于AuNPs的miRNA三重检测的微流控芯片。本实用新型通过将比色反应之后的AuNPs溶液利用该芯片进行过滤分离，停留在滤膜上的AuNPs，因为具有拉曼增强效果，可以对吸附在其表面的DNA分子的荧光基团进行拉曼检测。随着miRNA浓度的升高，形成的双链增加，吸附在AuNPs表面的DNA也会减少，停留在滤膜上与DNA探针结合的荧光基团的拉曼光谱强度也会降低；溶液中游离的双链随着miRNA浓度的升高而升高，荧光强度也会越来越高，结合比色结果，进行三重验证，提高检测的准确性。

为了解决本实用新型的技术问题，本实用新型采用的技术方案是：提供一种微流控过滤芯片，该芯片从上到下依次包括加样层、过滤层、检测层；其中，所述加样层上设有第一微腔；所述过滤层上与所述第一微腔对应的位置设有过滤膜；所述检测层上与所述过滤膜对应的位置设有第二微腔；进入所述第一微腔中的混合物在驱动力的作用下经过所述过滤膜进入所述第二微腔中，实现固液分离；所述的基底层上修饰多聚赖氨酸。

作为本实用新型的一种优选方式，所述的过滤膜为纳米孔径的过滤膜。

作为本实用新型的一种优选方式，所述的检测层上设有第三微腔，所述第三微腔通过微流道与所述第二微腔连接。

进一步优选地，所述的加样层上方设有抽吸层，所述抽吸层与所述第三微腔连接，用于传递负压抽吸力。

作为本实用新型的一种优选方式，所述的检测层下方设有多聚赖氨酸衬底。