[实用新型]一种用于联合检测多基因突变的试剂盒

说明书

本实用新型提供了一种用于联合检测多基因突变的试剂盒，所述用于联合检测多基因突变的试剂盒包括具有内腔的盒体(1)、与所述盒体(1)的一侧相连用于内腔开合的盒盖(2)；盒体(1)的内部设有衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有插孔，所述插孔内插设有保存管和联排管；联排管上设有多个半圆形缺口标记(10)，所述多个半圆形缺口标记均匀分布于所述联排管的裙边两侧；联排管的第一孔裙边的两侧分别设置有缺角(11)。本实用新型提供的用于联合检测多基因突变的试剂盒结构设计简单合理，便于运输与保存，并减少了运输中的光线及震动对试剂造成的影响；操作简便快捷，并在视觉上为用户提供标记，减少多加、错加及漏加样本的可能。

技术领域

本实用新型属于生物技术领域，涉及一种用于联合检测多基因突变的试剂盒。

背景技术

骨髓增殖性肿瘤(Myeloproliferative neoplasms，MPN)主要包括真性红细胞增多症(Polycythemia vera，PV)、原发性血小板增多症(Essential thrombocythemia，ET)、原发骨髓纤维化(Primary myelofibrosis，PMF)及慢性粒细胞性白血病(Chronicmyelogenous，CML)。

CALR突变可激活JAK-STAT信号途径，参与MPN的发生。Nangalia等通过对MPN患者进行全外显子测序，发现了CALR基因突变(CALR exon 9indel)在ET、PMF中的突变率分别为15％～35％、23％～40％。CALR基因突变类型主要是TYPE1突变(c.1092_1143del52，第9号外显子上52bp的缺失)以及TYPE2突变(c.1154_1155ins TTGTC，第9号外显子上5bp的插入)。

促血小板生成素受体(MPL)属于造血因子受体家族，与配体结合能激活JAK-STAT等信号转导途径，对调节髓细胞的增生和巨核细胞的成熟具有重要影响。国际上已发现多种MPL基因突变类型，最常见的为W515L(TGGTTG)和W515K(TGGAAG)。3％～5％的ET患者和5％～10％的PMF患者存在MPL基因突变(MPL W515L/K)。

研究表明，JAK2V617F点突变阴性的PV患者存在JAK2外显子12的突变，这些外显子12的突变改变了539、543及547位密码子附近的多种核苷酸。根据文献统计，约有3％～5％的PV患者(JAK2V617F阴性)带有JAK2外显子12突变，主要突变类型包括K539L、e12 del(N542-E543del和E543-D544del)。

目前，MPN的检测方法主要包括细胞形态观察、流式细胞术、细胞遗传学分析及分子生物学检测。李玉玲(李玉玲.高通量测序技术在骨髓增殖性肿瘤临床检测中的方法学建立及其初步应用[M].广州:南方医科大学，2016.)对MPN相关的23个目标基因进行了多重PCR引物的设计，同时结合Ion Torrent PGM的测序方法，对20例MPN患者的基因突变情况进行了检测，结果显示几乎所有的三阴性MPN患者都存在基因突变，其中以表观遗传修饰基因TET2突变最为常见。此方法特异性好，灵敏度高，但对长片段的缺失检出存在缺陷，此外，由于需要对PCR扩增产物进行建库及测序分析，成本较高，不适合应用于大批量样本的检测中。

目前，市面上也存在一些针对MPN相关基因突变的检测试剂盒。CN106636415A公开了一种用于检测MPN相关基因突变的试剂盒，试剂盒内包括MPN相关的17个基因全部外显子进行扩增的多重PCR引物，通过二代测序技术来对扩增结果进行分析，具有检测效率高、突变基因覆盖面广及检出率高的优点。然而，此试剂盒需要用户自行配置反应液，当样本数较多时，操作繁琐，容易出现多加、漏加及错加反应液的情况，导致实验失败，且同样存在成本较高的问题。