[实用新型]一种抗PLA2R抗体的定量检测试纸

说明书

本实用新型公开了一种抗PLA2R抗体的定量检测试纸，包括粘性底层，其特征在于：所述粘性底层的顶部通过粘接固定有样品垫，所述样品垫的一侧安装有结合垫，所述结合垫的一侧安装有硝酸纤维素膜，所述粘性底层的顶部设置有定量装置，所述粘性底层的两侧对应开设有滑槽，所述定量装置包括定量盒，所述定量盒的底部通过焊接固定有滑座，所述滑座的底部与滑槽滑动连接，所述定量盒的内部设置有若干个容纳槽，且容纳槽的内部滑动设置有活塞板，所述定量盒的底部安装有若干个滴管，所述滴管与样品垫位于同一垂直面内，所述滴管与容纳槽贯通连接，所述定量盒的顶部安装有支架，本实用新型，具有实用性强和操作简便的特点。

技术领域

本实用新型涉及试纸技术领域，具体为一种抗PLA2R抗体的定量检测试纸。

背景技术

抗体检测试纸是一种免疫系统治疗过程中常采用的一种检测抗原的方法。检测抗PLA2R抗体IgG的含量变化，既能提高诊断灵敏度，又能在一定程度上帮助判断疾病预后，有重大临床应用价值。

而现有的抗体检测试纸检测时，会测定PLA2R-IgG标准品的荧光值及标准品浓度绘制标准曲线，样本的荧光值代入标准曲线计算样品中的PLA2R-IgG的含量，此时往往会滴入不同量的待检测液体，无法实现定量功能，待检测试剂总量不同会导致检测结果的偏差，实用性差；如果采用专门的定量仪器会使得携带不方便，操作麻烦。因此，设计实用性强和操作简便的一种抗PLA2R抗体的定量检测试纸是很有必要的。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种抗PLA2R抗体的定量检测试纸，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本实用新型提供如下技术方案：一种抗PLA2R抗体的定量检测试纸，包括粘性底层，其特征在于：所述粘性底层的顶部通过粘接固定有样品垫，所述样品垫的一侧安装有结合垫，所述结合垫的一侧安装有硝酸纤维素膜，所述粘性底层的顶部设置有定量装置。

其制备方法的特征在于：PLA2R抗原的制备与纯化：根据基因库中“PLA2R”的全序列构建质粒，转染细胞，将25μlMegaTran1.0和5μg带有flag标签PLA2R质粒的混合液加入细胞培养皿中，裂解收集lysate，取lysate40ml，用0.45μm的滤膜过滤、冲洗，用500μl0.1MpH3.5甘氨酸洗脱，洗脱液加入1MpH9.0的Tris缓冲液调整pH值至7.3，加入10％甘油保存。标记兔抗人IgG抗体的包裹镧系元素的纳米微球的制备：取包裹镧系元素的纳米微球，双蒸水配成1％浓度的纳米微球溶液，取250μL溶液，向其中加入碳二亚胺和兔抗人IgG抗体，调节碳二亚胺的终浓度为19.5-20.5mmol/L，纳米微球与兔抗人IgG抗体的质量比为50:1；室温反应2h，14000r/min离心，去除上清液后，加入质量浓度为1％的BSA溶液，至BSA终浓度为0.05mol/L，用pH为7.15-7.25的磷酸盐缓冲液至纳米微球浓度为0.99-1.01μg/L保存。

其实验原理的特征在于：采用定量喷膜仪将包裹镧系元素的纳米微球标记兔抗人IgG抗体喷涂于聚酯膜上，当样品垫上加入抗PLA2R抗体阳性患者血清后，在毛细作用下，样品液向吸水纸末端泳动，同时样本中的待测物与时间分辨荧光微球上的二抗(标记兔抗人IgG抗体)形成二抗-待测物复合物(标记兔抗人IgG—抗PLA2R-IgG)，随着层析作用，复合物向前移动，到达识别待测物(抗PLA2R-IgG)的检测线处，形成二抗-待测物-针对待测物的特异性抗体夹心复合物，在检测线处出现时间分辨荧光微球的聚集。未结合的时间分辨荧光微球继续前行，到达质控线时，针对二抗的抗体(兔抗兔IgG)与时间分辨荧光微球上的二抗结合，在质控线处出现时间分辨荧光微球的聚集，过量的时间分辨荧光微球二抗则继续向吸水块迁移。据测定的PLA2R-IgG标准品的荧光值及标准品浓度绘制标准曲线，样本的荧光值代入标准曲线计算样品中的PLA2R-IgG的含量，实验结果表明，当滴入含量为100μL和200μL时测定的PLA2R-IgG标准品的荧光值不同，所以对滴入的量进行控制，使其保持一致是实验的先决条件。