[发明专利]AAV介导的RPGR X连锁视网膜变性的基因编辑治疗

权利要求书

1.特异性靶向编码视网膜色素变性GTP酶调节剂的基因(RPGR基因)的gRNA，其特异性结合所述RPGR基因的第14号内含子。

2.根据权利要求1所述的gRNA，其特异性结合SEQ ID NO:102所示的核苷酸序列，或特异性结合与SEQ ID NO:102所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

3.根据权利要求1-2中任一项所述gRNA，其中所述gRNA包含SEQ ID NO.105-126中任一项所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求1-3中任一项所述gRNA，其中所述gRNA包含5’-(X)n-SEQ ID NO:105-126中任一项所示的核苷酸序列-骨架序列-3’，其中X为选自A、U、C和G中任一个的碱基，且n为0-15中的任一整数。

5.根据权利要求1-4中任一项所述gRNA，其中所述gRNA为单链向导RNA(sgRNA)。

6.一种或多种分离的核酸分子，其编码权利要求1-5中任一项所述的特异性靶向RPGR基因的gRNA。

7.质粒，其包含权利要求6所述的分离的核酸分子。

8.根据权利要求7所述的质粒，其为病毒载体。

9.根据权利要求7-8中任一项所述的质粒，其包括编码DNA核酸内切酶的核酸分子。

10.根据权利要求9所述的质粒，其中所述DNA核酸内切酶包括Cas核酸酶。

11.根据权利要求9-10中任一项所述的质粒，其中所述DNA核酸内切酶包括Cas9核酸酶、其同源物、其天然存在分子的重组体、其密码子优化版本，和/或其经修饰版本。

12.核酸分子，其包含密码子优化的人RPGR ORF15核苷酸序列。

13.根据权利要求12所述的核酸分子，其包含SEQ ID NO:44所示的核苷酸序列。

14.靶向载体，其包含权利要求12-13中任一项所述的核酸分子。

15.根据权利要求14所述的靶向载体，其包含1)5’上游靶区域；2)权利要求12-13中任一项所述的核酸分子；以及3)3’下游靶区域；其中所述5’上游靶区域和/或所述3’下游靶区域能够被权利要求1-4中任一项所述gRNA所识别和/或切割。

16.根据权利要求15所述的靶向载体，其中所述5’上游靶区域和/或所述3’下游靶区域包含核苷酸突变，所述突变提高了权利要求12-13中任一项所述的核酸分子被导入受试者的基因组的准确率。

17.根据权利要求15-16中任一项所述的靶向载体，其中所述5’上游靶区域包含SEQ IDNO:96-99中任一项所示的核苷酸序列。

18.根据权利要求15-17中任一项所述的靶向载体，其中所述3’下游靶区域包含SEQ IDNO:100所示的核苷酸序列。

19.细胞，其包含权利要求12-13中任一项所述的核酸分子。

20.根据权利要求19所述的细胞，其包括HEK293细胞和/或尿液肾上皮细胞。

21.根据权利要求19-20中任一项所述的细胞，其经修饰后具备分化能力。