[发明专利]使用来自青鳉属的转座酶将核酸构建体整合入真核细胞

权利要求书

1.一种多核苷酸，其包含编码转座酶的开放阅读框，所述转座酶的氨基酸序列与SEQID NO：782至少90％相同，可操作地连接至异源启动子。

2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述转座酶相对于SEQ ID NO：782的序列包含表1的C列和D列中所示的突变。

3.根据权利要求2所述的多核苷酸，其中所述转座酶相对于SEQ ID NO：782的序列在选自22、124、131、138、149、156、160、164、167、171、175、177、202、206、210、214、253、258、281、284、361、386、400、408、409、455、458、467、468、514、515、524、548、549、550和551的氨基酸位置处包含突变。

4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其中所述转座酶相对于SEQ ID NO：782包含选自以下的突变：E22D、A124C、Q131D、L138V、F149R、L156T、D160E、Y164F、I167L、A171T、R175K、K177N、T202R、I206L、I210L、N214D、V253I、V258L、I281F、A284L、L361I、V386I、M400L、S408E、L409I、F455Y、V458L、V467I、L468I、A514R、V515I、S524P、R548K、D549K、D550R和S551R，所述转座酶可选地包括选自选自所述组的至少2个、3个、4个，或5个。

5.根据权利要求2所述的多核苷酸，其中所述转座酶的所述氨基酸序列选自SEQ IDNO：782或805-908。

6.根据前述权利要求中任意一项所述的多核苷酸，其中所述转座酶可以从SEQ ID NO：41切除或转座转座子。

7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述转座酶的切除活性或转座活性为SEQ IDNO：782的活性的至少10％。

8.根据前述权利要求中任意一项所述的多核苷酸，其中所述启动子在体外转录反应中具有活性。

9.根据权利要求1-7中任意一项所述的多核苷酸，其中所述启动子在真核细胞中具有活性。

10.根据权利要求9所述的多核苷酸，其中所述真核细胞是哺乳动物细胞，可选地，选择所述开放阅读框的密码子用于哺乳动物细胞表达。

11.一种编码多肽的分离的mRNA，所述多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO：782至少90％相同，并且其中所述mRNA序列在所述mRNA和SEQ ID NO:781之间的相应位置处相对于SEQ IDNO：781包含至少10个同义密码子差异，可选地，其中选择所述mRNA中在所述相应位置处的密码子用于哺乳动物细胞表达。

12.根据权利要求1-10中任意一项所述的多核苷酸，其中所述开放阅读框进一步编码与所述转座酶融合的核定位序列。

13.根据权利要求1-10中任意一项所述的多核苷酸，其中所述开放阅读框进一步编码与所述转座酶融合的异源DNA结合域。

14.根据权利要求13所述的多核苷酸，其中所述DNA结合结构域衍生自CRISPR Cas系统，或锌指蛋白，或TALE蛋白。

15.一种编码多肽的非天然存在的多核苷酸，所述多肽的序列与SEQ ID NO：782至少90％相同，其中所述多核苷酸序列在所述多核苷酸和SEQ ID NO:781之间的相应位置处相对于SEQ ID NO：781具有至少10个同义密码子差异，可选地，其中选择所述多核苷酸中在所述相应位置处的密码子用于哺乳动物细胞表达。