[发明专利]可控的基因组编辑系统

权利要求书

1.一种可调控基因表达的构建体，其包含编码RNA的核酸，所述RNA包含

(1)编码基因组编辑酶的序列；和

(2)可操作地连接至所述序列的调控表达盒，所述调控表达盒包含

(i)侧翼为上游内含子和下游内含子的条件性外显子，和

(ii)可操作地连接至所述条件性外显子的适体结构域，其中所述适体结构域能够与效应分子结合，以触发所述RNA的结构改变，从而调控所述条件性外显子的剪接和所述基因组编辑酶的表达。

2.根据权利要求1所述的构建体，其中所述基因组编辑酶在存在所述效应分子的条件下表达。

3.根据权利要求1所述的构建体，其中在存在所述效应分子条件下的剪接过程中，跳过所述条件性外显子。

4.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其中所述效应分子是四环素。

5.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其中优化所述序列以包含外显子剪接增强子。

6.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其中所述基因组编辑酶是位点特异性核酸酶或位点特异性重组酶。

7.根据权利要求6所述的构建体，其中所述位点特异性核酸酶选自下组：Cas9、Cas12、ZFN、TALEN和大范围核酸酶。

8.根据权利要求6所述的构建体，其中所述位点特异性重组酶选自下组：Cre、FLP、λ整合酶、phiC31整合酶、Bxb1整合酶、γ-δ解离酶、Tn3解离酶和Gin转化酶。

9.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其中所述基因组编辑酶具有与SEQ ID NO:1至少90％同一性的序列。

10.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其中所述序列与SEQ ID NO:5、7或9具有至少90％同一性。

11.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其中所述序列包含外显子剪接增强子(ESE)优化的区域，所述区域与SEQ ID NO:11、13或15具有至少90％同一性。

12.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其中所述适体结构域具有与SEQ ID NO:17、19或21至少90％同一性的序列。

13.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其中所述条件性外显子具有与SEQ IDNO:23至少90％同一性的序列。

14.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其中所述上游内含子具有与SEQ ID NO:25至少90％同一性的序列。

15.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其中所述下游内含子具有与SEQ ID NO:27至少90％同一性的序列。

16.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其中所述调控表达盒包含与SEQ ID NO:29至少90％同一性的序列。

17.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其中将所述调控表达盒插在以下之间(1)SEQ ID NO:11的核苷酸位置97和98；或者

(2)SEQ ID NO:11的核苷酸位置498和499。

18.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其包含SEQ ID NO:30、32或34。

19.根据前述任一项权利要求所述的构建体，其被包含在载体中。