[发明专利]一种以烟酰胺为原料制备烟酰胺单核苷酸的方法

权利要求书

1.一种以烟酰胺为原料制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)在乙腈、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷或者液态二氧化硫溶剂中，用三氟甲磺酸三甲基硅酯或四氯化锡催化烟酰胺和四乙酰核糖于20～40℃的温度下进行反应，得第一反应液；

2)向第一反应液中加入碳酸氢钠、碳酸钠或氢氧化钠，调节pH值为3～5，得第二反应液；

3)向第二反应液中加入甲醇钠溶液，于-15～-5℃的温度下进行反应，得第三反应液；

4)向第三反应液中加入盐酸，调节pH值为3～5，得第四反应液；

5)用膜浓缩设备对第四反应液依次进行微滤和纳滤处理，得烟酰胺核糖溶液；

6)在Mg离子、ATP和缓冲液存在的环境中，于35～39℃的温度下，用烟酰胺核糖激酶催化步骤5)得到的烟酰胺核糖溶液进行反应，控制反应过程的pH值为7.5～8.0，反应结束后即得烟酰胺单核苷酸。

2.根据权利要求1所述的以烟酰胺为原料制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于：所述步骤1)的反应在25～35℃的温度下进行。

3.根据权利要求1所述的以烟酰胺为原料制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述三氟甲磺酸三甲基硅酯、所述烟酰胺与所述四乙酰核糖的摩尔比为1.2～5:1.2～2:1。

4.根据权利要求1所述的以烟酰胺为原料制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于：所述步骤3)的反应在-10～-5℃的温度下进行。

5.根据权利要求1所述的以烟酰胺为原料制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述甲醇钠与所述四乙酰核糖的摩尔比为1～5:1。

6.根据权利要求1所述的以烟酰胺为原料制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于：所述步骤4)的过程保持反应液的温度为-10～-5℃。

7.根据权利要求1所述的以烟酰胺为原料制备烟酰胺单核苷酸的方 法，其特征在于：所述步骤5)中，所述微滤过程采用的微滤膜孔径为0.2～1μm，所述纳滤过程采用截留分子量为150～250的中空纤维膜。

8.根据权利要求1所述的以烟酰胺为原料制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于所述步骤6)中，整个酶催化反应体系中各物质的加入量为：Mg离子10～50mM，ATP 10～30mM，缓冲液20～100mM，烟酰胺核糖9～27mM，烟酰胺核糖激酶0.2～1g/L。

9.根据权利要求1所述的以烟酰胺为原料制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于：所述步骤6)中，所述Mg离子为MgCl ₂。

10.根据权利要求1所述的以烟酰胺为原料制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于：所述步骤6)中，所述缓冲液为K ₂HPO ₄缓冲液。