[发明专利]转录因子介导的促进直接体细胞胚胎发生

权利要求书

1.一种用于大麻(Cannabis sativa L.)光自养微繁殖液体培养基的重组蛋白，所述重组蛋白包含生长诱导部分与摄取增强部分的融合，其中，所述生长诱导部分包含与植物生长发育相关的阿拉伯半乳聚糖蛋白和/或植物转录因子，所述摄取增强部分包含细胞穿透肽序列和核定位信号，所述核定位信号由肽序列SEQ ID NO 1编码。

2.如权利要求1所述的重组蛋白，其中，所述细胞穿透肽序列包含形成多精氨酸转导域的7至25精氨酸序列。

3.如前述权利要求中任一项所述的重组蛋白，其中，所述生长诱导部分包含所述植物转录因子，所述植物转录因子包含以下一种或多种：Baby Boom，BBM；Leafy Cotyledon，LEC；Wuschel，WUS；含RWP-RK结构域蛋白4，RKD4；伤口诱导脱分化蛋白1，WIND1；和Plethora2，PLT2。

4.如权利要求3所述的重组蛋白，其中，所述植物转录因子包含来自拟南芥的AP2样乙烯响应转录因子BBM或所述来自拟南芥的AP2样乙烯响应转录因子BBM的类似物，其中，所述类似物是宿主密码子优化的。

5.如权利要求4所述的重组蛋白，其中，所述宿主是本氏烟草。

6.如前述权利要求中任一项所述的重组蛋白，其中，所述重组蛋白由核苷酸序列SEQID NO 2编码。

7.一种植物细胞培养基，包含前述权利要求中任一项所述的重组蛋白。

8.如权利要求7所述的植物细胞培养基，包含浓度为0.05mg/L至5mg/L的所述重组蛋白。

9.如权利要求7或8所述的植物细胞培养基，还包含盐和/或维生素。

10.如权利要求7至9中任一项所述的植物细胞培养基，包含以下一种或多种：6-苄基氨基嘌呤，乙烯磷，凯茵庭，腐胺，亚精胺，过氧化氢，6-(Y,Y-二甲基烯丙基氨基)嘌呤，赤霉酸或赤霉素和萘乙酸。

11.如权利要求7至10中任一项所述的植物细胞培养基，其中，所述培养基是用于光自养微繁殖的液体培养基。

12.一种用于大麻(Cannabis sativa L.)微繁殖的方法，所述方法包括：

-获取来自大麻植株的外植体材料，

-通过在权利要求7至11中任一项所述的植物细胞培养基中在所述外植体材料中诱导胚胎发生来提供初级胚和/或次级胚。

13.如权利要求12所述的方法，其中，提供初级胚和/或次级胚包括光自养方法，其中，所述外植体材料接受光照以激发直接体细胞胚胎发生。

14.如权利要求13所述的方法，其中，所述接受光照包括暴露于来自光合有效辐射(PAR)源的波长400nm至700nm、光合光量子通量100至200μmol m²s^-1的光。