[发明专利]用于脂质化蛋白质结构的制备的方法在审
申请号: | 202080020874.7 | 申请日: | 2020-03-10 |
公开(公告)号: | CN113518923A | 公开(公告)日: | 2021-10-19 |
发明(设计)人: | S·沃尔;S·斯席勒;S·盖斯勒 | 申请(专利权)人: | 默克专利股份公司 |
主分类号: | G01N33/543 | 分类号: | G01N33/543;G01N33/532 |
代理公司: | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人: | 权陆军;彭昶 |
地址: | 德国达*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 脂质化 蛋白质 结构 制备 方法 | ||
1.用于制备缀合物的方法,其中所述缀合物包含生物分子、酶标记、亲水间隔基、接头和亲脂部分,这种方法包括在水性介质中酶促偶联包含酶标记、亲水间隔基、接头和亲脂部分的组分与生物分子和缀合物的纯化。
2.根据权利要求1的方法,其中所述生物分子是多肽。
3.根据权利要求2的方法,其中所述生物分子是抗原、细胞黏着蛋白如整联蛋白或钙黏着蛋白,肽激素,如生长因子,细胞因子如白细胞介素,或与任何这些分子相关的受体,酶或天然或人工抗体或其片段。
4.根据权利要求3的方法,其中所述抗体是单克隆抗体或其片段,例如单链可变片段(scFv),可变片段(Fv),或抗原结合片段(Fab、Fab’或F(ab’)2);骆驼科动物或软骨鱼来源的仅重链抗体或其片段,例如VHH或vNAR,或其中人工抗体是DARPin、adnectine、anticalin或affibody。
5.根据权利要求3或4的方法,其中所述生物分子是衍生自骆驼科动物仅重链抗体的可变结构域(VHH)的单结构域抗体。
6.根据权利要求1-5的方法,其中所述生物分子在其与包含酶标记、亲水间隔基、接头和亲脂部分的组分偶联之前携带C-末端基序用于通过转肽基酶,优选分选酶A进行酶促缀合。
7.根据权利要求6的方法,其中所述C-末端基序由氨基酸序列“亮氨酸-脯氨酸-X-苏氨酸-甘氨酸”(LPXTG)组成,其中“X”可以是任何蛋白原性氨基酸。
8.根据权利要求7的方法,其中存在于所述LPXTG基序中的所述蛋白原性氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸或组氨酸,优选谷氨酸。
9.根据权利要求1-8中一项或多项的方法,其中所述酶标记是脂族胺,单甘氨酸,具有一个或多个N-末端甘氨酸,优选五甘氨酸的肽序列,其C-末端连接至亲水间隔基。
10.根据权利要求1-9中一项或多项的方法,其中所述亲水间隔基是聚氧(C2-C3)亚烷基(例如聚乙二醇或聚丙二醇)、多糖(例如葡聚糖、支链淀粉、壳聚糖、透明质酸)、多聚唾液酸、聚乙烯亚胺,优选聚乙二醇。
11.根据权利要求1-10中一项或多项的方法,其中所述接头是异谷氨酰胺,在与3-氨基-1,2-丙二醇连接的δ-位置酰胺上,且在与亲水间隔基连接的α-位置胺官能上。
12.根据权利要求1-11中一项或多项的方法,其中所述亲脂部分是一个或多个彼此独立的饱和或不饱和、直链或支链烃链,例如链长为6-30个碳原子的脂肪醇或脂肪酸,或甾醇如胆固醇。
13.根据权利要求12的方法,其中所述亲脂部分包含两种各自与3-氨基-1,2-丙二醇的二醇基团醚连接的肉豆蔻醇。
14.根据权利要求1-13中一项或多项的方法,其中所述包含酶标记、亲水间隔基、接头和亲脂部分的组分(组分A)是DMA-PEG-G5。
15.根据权利要求1-14中一项或多项的方法,其包括步骤
(a)制备包含酶标记、亲水间隔基、接头和亲脂部分的组分的水性分散体;
(b)添加酶和生物分子;
(c)温育在步骤(b)中获得的混合物以产生缀合物;
(d)纯化步骤(c)中获得的缀合物。
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