[发明专利]通过抑制EBAG9增强溶细胞性T细胞活性

权利要求书

1.遗传修饰的细胞毒性T细胞，包含编码转基因抗原靶向构建体的一种或多种外源核酸分子，其中在所述细胞中，雌激素受体结合片段相关抗原9(EBAG9)的活性被抑制(与对照细胞毒性T细胞相比)。

2.根据前述权利要求所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述EBAG9活性的抑制与溶细胞颗粒和/或含颗粒酶的分泌性溶酶体的释放增加有关(与对照细胞毒性T细胞相比)。

3.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述转基因抗原靶向构建体是嵌合抗原受体(CAR)。

4.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述转基因抗原靶向构建体是T细胞受体(TCR)。

5.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述EBAG9活性的抑制通过敲低EBAG9而获得，优选通过RNA干扰EBAG9表达而获得，例如通过小干扰RNA(siRNA)、短发夹RNA(shRNA)和/或微RNA(miRNA)而获得。

6.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述EBAG9活性的抑制是通过用一种或多种外源核酸分子对T细胞基因组进行遗传修饰而获得的，所述外源核酸分子包含编码转基因抗原靶向构建体和用于敲低EBAG9的RNA干扰序列的载体。

7.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的T细胞，其中，所述EBAG9活性的抑制是通过破坏EBAG9基因的表达和/或序列来对T细胞基因组进行遗传修饰而获得的，其中优选地，编码所述转基因抗原靶向构建体的外源核酸分子位于EBAG9基因内、邻近EBAG9基因或与EBAG9基因关联的T细胞基因组中，从而破坏所述EBAG9基因的表达和/或序列。

8.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的T细胞作为药物的用途。

9.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的T细胞作为治疗增殖性疾病的药物的用途，其中，由所述转基因抗原靶向构建体所靶向的抗原在经历病理性细胞增殖和/或与病理性细胞增殖有关的靶细胞中表达。

10.根据前述权利要求中任一项所述遗传修饰的T细胞的用途，其中，所述增殖性疾病是恶性血液病，例如，非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、急性淋巴母细胞性白血病和/或多发性骨髓瘤，并且其中，所述由转基因抗原靶向构建体所靶向的抗原在所述恶性血液病的癌细胞中表达，所述抗原例如为肿瘤相关抗原(TAA)。

11.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的T细胞的用途，其中，所述恶性血液病是表达CD19的B细胞癌，并且其中，所述转基因抗原靶向构建体结合CD19；或其中，所述恶性血液病是表达BCMA的B细胞癌，并且其中，所述转基因抗原靶向构建体结合BCMA；或其中，所述恶性血液病是表达CXCR5的癌症，并且其中，所述转基因抗原靶向构建体结合CXCR5。

12.根据权利要求9所述的遗传修饰的T细胞作为治疗自身抗体依赖性自身免疫疾病的药物的用途，其中，由转基因抗原靶向构建体所靶向的抗原在与自身抗体产生相关的靶细胞中表达，优选地其中，医学疾病是系统性红斑狼疮(SLE)或类风湿性关节炎。

13.一种适用于治疗增殖性疾病的药物组合物，所述药物组合物包含根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的T细胞，另外还包含药学上可接受的载体。

14.一种核酸载体或核酸载体的组合，所述核酸载体或核酸载体的组合包含编码抗原靶向构建体和用于敲低雌激素受体结合片段相关抗原9(EBAG9)的RNA干扰序列的序列。

15.一种用于增加遗传修饰的细胞毒性T细胞的溶细胞活性的体外方法，所述T细胞包含编码转基因抗原靶向构建体的一种或多种外源核酸分子，所述方法包括抑制所述T细胞中雌激素受体结合片段相关抗原9(EBAG9)的活性，其中，抑制EBAG9活性优选包括：

a.敲低EBAG9，优选通过RNA干扰EBAG9表达来敲低EBAG9，例如通过小干扰RNA(siRNA)、短发夹RNA(shRNA)和/或微RNA(miRNA)来敲低EBAG9，或

b.通过破坏EBAG9基因的表达和/或序列来对T细胞基因组进行遗传修饰，优选通过CRISPR/Cas9或TALEN对T细胞基因组进行遗传修饰。