[发明专利]测量色谱树脂的疏水性的方法

说明书

在某些实施方案中，本发明提供了一种测量色谱树脂的疏水性水平的方法。在某些实施方案中，本发明提供了一种选择用于从混合物中纯化目的蛋白的色谱树脂条件的方法，其中所述目的蛋白在色谱法过程中具有低的或没有聚集形成。在某些实施方案中，本发明提供了一种从多种色谱树脂中选择用于从混合物中纯化目的蛋白的色谱树脂的方法，其中所述目的蛋白在色谱法过程中具有低的或没有聚集形成。

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年3月29日提交的美国临时申请号62/826,260的优先权权益，将其通过引用以其整体并入本文。

背景技术

蛋白质的大规模经济纯化是生物制药行业日益重要的问题。治疗性蛋白质典型地使用原核或真核细胞系产生，所述细胞系经工程改造以由含有编码目的蛋白的基因的重组质粒表达所述蛋白质。从供给于细胞的组分混合物、细胞副产物、和蛋白质的聚集体形式中分离出希望的蛋白质至足够的纯度(例如，足以用作人治疗剂)对生物制剂制造商提出了艰巨的挑战。

因此，本领域中需要改善的蛋白质纯化方法，其可以用于加速基于蛋白质的治疗剂(诸如抗体)的大规模加工。

发明内容

在某些实施方案中，本发明提供了一种测量色谱树脂的疏水性水平的方法，其包括：(a)将荧光团与金纳米颗粒(GNP)混合以形成荧光团缀合的金纳米颗粒；(b)使所述荧光团缀合的金纳米颗粒与色谱树脂在溶液中接触；(c)除去上清液，并且将所述色谱树脂用洗涤缓冲液洗涤；以及(d)量化所述色谱树脂的荧光强度水平，从而测量所述色谱树脂的疏水性水平，其中来自(d)的荧光强度水平指示色谱树脂的疏水性水平。

任选地，所述色谱树脂选自离子交换色谱树脂、疏水相互作用色谱树脂、亲和色谱树脂、和混合模式色谱树脂。

任选地，所述荧光团选自硼-联吡咯甲烷(BODIPY)染料、8-苯胺基-1-萘磺酸(ANS)、4,4’-二苯胺基-1,1’-联萘基-5,5’-二磺酸(Bis-ANS)、6-丙酰基-2-(N,N-二甲基氨基)萘(PRODAN)、四苯基乙烯衍生物、和尼罗红(Nile Red)。优选地，所述荧光团是硼-联吡咯甲烷(BODIPY)染料。任选地，所述金纳米颗粒具有5nm、10nm、15nm、20nm、30nm、40nm、50nm、60nm、70nm、80nm、90nm或100nm的直径。任选地，通过将BOIDPY NHS分子的NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)基团与预附接在GNP表面上的伯胺基团交联，将所述BODIPY与GNP缀合。可替代地，可以使用其他连接化学将BODIPY与GNP缀合，所述其他连接化学包括生物素-连接至-链霉亲和素；和马来酰亚胺-连接至-巯基。

在某些实施方案中，本发明提供了一种选择用于从混合物中纯化目的蛋白的色谱树脂条件的方法，其中所述目的蛋白在色谱法过程中具有低的或没有聚集形成，所述方法包括：(a)将荧光团与金纳米颗粒(GNP)混合以形成荧光团缀合的金纳米颗粒；(b)在不同条件下使所述荧光团缀合的金纳米颗粒与色谱树脂在溶液中接触；(c)除去上清液，并且将所述色谱树脂用洗涤缓冲液洗涤；(d)量化由(b)中的不同条件得到的所述色谱树脂的荧光强度水平；(e)测量在不同条件下所述色谱树脂的疏水性水平，其中来自(d)的荧光强度水平指示色谱树脂的疏水性水平；以及(f)选择其中所述色谱树脂的疏水性水平导致在所述目的蛋白的色谱纯化过程中低的或没有聚集形成的色谱树脂条件。

任选地，所述色谱树脂选自离子交换色谱树脂、疏水相互作用色谱树脂、亲和色谱树脂、和混合模式色谱树脂。