[发明专利]用于稳定化微小RNA的组合物和方法

说明书

本发明涉及微小RNA分子的稳定化。本文所述的组合物和方法可以有利地用于提供内部对照和标准微小RNA以便包含到试剂盒中，所述试剂盒可用于生物流体中的微小RNA的标准化的相对或绝对定量。

本发明涉及微小RNA(miRNA)分子的稳定化。本文所述的组合物和方法可以有利地用于提供标准微小RNA以便包含到试剂盒中，所述试剂盒可用于生物流体中的miRNA的相对或绝对定量。

循环miRNA的许多特点使它们成为一类有吸引力的生物标志物。它们是稳定的，它们的序列是进化保守的，miRNA表达通常是组织或病理学特异性的，并且因为它们可以通过实时PCR检测，所以测定可以是高度灵敏和特异性的。然而，还存在仍然需要解决的与循环miRNA的检测相关的挑战。其中的一个挑战涉及血液中总RNA的量低，这使得难以测量分离的RNA的浓度和量。因此，至关重要的是i)具有目标miRNA的校准且精确的阳性对照，和ii)基于起始材料的量和miRNA提取，精确地标准化检测到的miRNA值的方差。通过寻找“管家”循环RNA来尝试标准化。一些报道使用U6或其它miRNA(例如，miR-16)作为管家RNA。然而，这些RNA的水平在病理状态下经常改变。其他人报道了一种掺加标准化方法，其中在纯化程序期间添加3种合成秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)miRNA(与人miRNA没有同源性)并且用于数据标准化。然而，尽管miRNA在生物流体中相对稳定，它们与蛋白质和脂质结合并且被包装到大泡中，但合成miRNA容易被RNA酶水解，因此难以处理或使用。这是主要的问题，因为掺加方法应当使用已知浓度的miRNA标准品，这是对来自生物流体的miRNA水平的绝对或相对定量的要求。

本发明提供了解决所述问题的组合物和方法。

本发明人在此表明，当与脂质载体复合时，可以将合成miRNA有利地引入可用于疾病的诊断、预后或监测的试剂盒中。

因此，本发明的第一方面涉及一种诊断试剂盒，其包括一个或多个容器，所述容器包含合成miRNA和脂质载体，其中所述合成miRNA处于限定的浓度。

在本发明的一个特定方面，涉及一种诊断试剂盒，其包括一个或多个容器，所述容器包含合成miRNA、脂质载体和基质(例如，合成血清、贫核酸血浆、血液源样品)，其中所述合成miRNA处于限定的浓度。

在一个特定实施方式中，试剂盒包括多于一个容器。

在第一变体中，每个容器可以包含相同的合成miRNA，所述合成miRNA在每个不同的容器中处于不同的限定浓度。例如，试剂盒可以包括包含限定浓度的合成miRNA的第一容器，和至少一个包含与第一容器相同的合成miRNA的第二容器，其中第二容器中的所述合成miRNA的浓度不同于第一容器中的所述合成miRNA的浓度。所述试剂盒可以包括包含相同合成miRNA的另外的第三容器，其中第三容器中的合成miRNA的浓度不同于第一容器中的所述合成miRNA的浓度以及第二容器中的所述合成miRNA的浓度。试剂盒可以包括一个或多个附加的容器，所述容器含有不同浓度的相同的合成miRNA。

在第二变体中，试剂盒包括：

-一个或多个包含第一合成miRNA的容器；以及

-一个或多个包含不同于第一miRNA的第二合成miRNA的容器。

例如，试剂盒可以包括：

-第一组容器，其含有第一合成miRNA，其中所述第一合成miRNA在第一组容器的每个容器中处于不同的浓度；以及

-第二组容器，其含有第二合成miRNA，其中所述第二合成miRNA在第二组容器的每个容器中处于不同的浓度。