[发明专利]非靶脱氨反应减低的核碱基编辑器和用于定性核碱基编辑器的测定

权利要求书

1.一种融合蛋白，其包括插入Cas9多肽的柔性环内的脱氨酶，其中该融合蛋白包括结构：

NH₂-[Cas9的N末端片段]-[脱氨酶]-[Cas9的C末端片段]-COOH，

其中“]-[“的每个实例是可选的连接子。

2.一种融合蛋白，其包括两侧翼为Cas9多肽的N末端片段和C末端片段的脱氨酶，其中该N末端片段的C端或该C末端片段的N端包括Cas9多肽的柔性环的一部分。

3.如权利要求1或2所述的融合蛋白，其中该融合蛋白的脱氨酶使靶多核苷酸序列中的靶核碱基脱氨基。

4.如权利要求3所述的融合蛋白，其中当该融合蛋白使靶核碱基脱氨基时，该柔性环包括靠近该靶核碱基的氨基酸。

5.如权利要求4所述的融合蛋白，其中该柔性环包括该Cas9多肽的α-螺旋结构的一部分。

6.如权利要求4或5所述的融合蛋白，其中与包括融合至SEQ ID NO:1的N端或C端的脱氨酶的末端融合蛋白相比，该靶核碱基以较低的脱靶脱氨反应被脱氨基。

7.如权利要求4或5所述的融合蛋白，其中该靶核碱基与靶多核苷酸序列中的原间隔序列临近基序(PAM)序列相距1至20个核碱基。

8.如权利要求7所述的融合蛋白，其中该靶核碱基在该PAM序列上游2至12个核碱基处。

9.如权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其中该柔性环包括一区域，其选自由SEQID NO:1中所编号的位置530至537、569至579、686至691、768至793、943至947、1002至1040、1052至1077、1232至1248和1298至1300或其相应的区域的氨基酸残基所组成的群组。

10.如权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其中该脱氨酶是插入SEQ ID NO:1中所编号的氨基酸位置768至769、791至792、792至793、1015至1016、1022至1023、1026至1027、1029至1030、1040至1041、1052至1053、1054至1055、1067至1068、1068至1069、1247至1248或1248至1249或其相应的氨基酸位置之间。

11.如权利要求10所述的融合蛋白，其中该脱氨酶是插入SEQ ID NO:1中所编号的氨基酸位置768至769、792至793、1022至1023、1026至1027、1040至1041、1068至1069或1247至1248或其相应的氨基酸位置之间。

12.如权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其中该脱氨酶是插入SEQ ID NO:1中所编号的氨基酸位置1016至1017、1023至1024、1029至1030、1040至1041、1069至1070或1247至1248或其相应的氨基酸位置之间。

13.如权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其中该N末端片段包括如SEQ ID NO:1中所编号的Cas9多肽的氨基酸残基1至529、538至568、580至685、692至942、948至1001、1026至1051、1078至1231和/或1248至1297或其相应的残基。

14.如权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其中该C末端片段包括如SEQ ID NO:1中所编号的Cas9多肽的氨基酸残基1301至1368、1248至1297、1078至1231、1026至1051、948至1001、692至942、580至685和/或538至568或其相应的残基。