[发明专利]引入靶特异性外源基因的方法

说明书

本公开提供了可用于通过TI(靶向整合)转化动物细胞的热点。在CHO细胞基因组中LOC103164262附近发现了本公开的热点。或者，本公开涉及已将外源DNA引入到所述热点中的转化细胞，以及通过培养细胞产生由所述DNA编码的多肽的方法。

技术领域

本公开涉及以靶特异性方式将外源DNA引入动物细胞基因组的方法、通过使用这些方法获得的转化细胞、以及生产由外源DNA编码的多肽的方法。

背景技术

通过基因重组技术在培养细胞中表达诸如细胞因子或抗体的多肽并大量生产该多肽的方法是众所周知的。此类多肽生产技术通常包括将编码目标多肽的多核苷酸以可表达形式引入细胞以产生转化细胞和从其培养物中回收积累的目标多肽的步骤。广泛用作待转化细胞的是微生物、昆虫、植物或动物的细胞。其中，动物细胞被广泛用作获得动物源多肽的合适的宿主细胞。通过在动物细胞中表达多肽，预期多肽的诸如糖基化和折叠的翻译后修饰将以更接近生物体中产生多肽的环境的方式发生。

当在动物细胞中表达外源DNA时，通常用包含编码目标多肽的多核苷酸的表达载体转化动物细胞。然而，与引入基因组时不同，作为表达载体引入细胞的外源DNA通常不会复制，也不会通过细胞分裂遗传，因此难以稳定地保留其性状。因此，尽管用表达载体的转化对于在实验环境中用于瞬时表达是有用的，但它在工业生产中的应用留下了问题。

通过将外源DNA引入动物细胞的基因组，可以稳定地保留源自表达载体的性状。这是因为引入基因组的多核苷酸极有可能通过细胞分裂进行复制并稳定保留。基于这一想法，以动物细胞为平台，以工业规模稳定生产多种生物物质成为可能。

但是，很明显，即使将外源DNA引入基因组，也不总是能够获得高表达的转化细胞。引入基因组的外源DNA的表达水平通常根据引入的位置而不同，并不总是能够有效地选择所需的转化细胞。

已提出定点整合(TI)作为能够解决将外源DNA引入基因组(专利文献1-3)中的问题的技术之一。在TI中，预先确认适合外源DNA引入和表达的基因组区域，并将待表达的外源DNA位点特异性整合到确认的基因组区域中。TI可以说是随着基因组位点特异性重组技术的改进而产生的一种新的基因重组技术。作为TI的结果，获得的转化细胞的外源DNA等的表达水平的可预测性提高，并且可以预期有效获得具有所需性状的转化细胞。在TI中，适合引入外源DNA的基因组区域通常被称为热点。到目前为止，已经在用作用于转化的宿主细胞的各种细胞的基因组上的广泛区域中发现了热点。此外，还报道了将TI应用于通过动物细胞生产单克隆抗体以获得可用于生产的转化细胞的尝试(专利文献4，非专利文献1-2)。

[引文列表]

[专利文献]

[专利文献1]国际公开号：WO 2008/151219

[专利文献2]国际公开号：WO 2013/190032

[专利文献3]国际公开号：WO 2016/064999

[专利文献4]国际公开号：WO 2017/184831

[非专利文献]

[非专利文献1]Biotechnol.Prog.，2015，第31卷，第6期，第1645-1656页

[非专利文献2]Methods 95(2016)第3-12页

发明内容

技术问题

本公开的一个目的是提供用于定点整合(TI)的新热点。

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