[发明专利]从干细胞衍生的定形内胚层生成胰腺内胚层

权利要求书

1.将源自人多能干细胞的定形内胚层细胞分化为胰腺内胚层前体的方法，其包括在包含视黄酸受体(RAR)拮抗剂的培养基中培养所述定形内胚层(DE)的步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法进一步包括在包含RAR激动剂的细胞培养基中培养所述胰腺内胚层前体，从而诱导胰腺内胚层(PE)的步骤，其中所述细胞为PDX1+/NKX6.1+双阳性。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述视黄酸受体(RAR)拮抗剂选自AGN193109、AGN 194431、AGN 194301、SR 11335、BMS 453、BMS 195614、LE 135、LG 100815、MM11253、CD 2665和ER 50891。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述视黄酸受体(RAR)拮抗剂是AGN 193109。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述视黄酸受体(RAR)拮抗剂的浓度为0.5-100μM、1-50μM、1-300μM、1-250μM、1-20μM、3-17μM、5-15μM或7-12μM。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中权利要求1的所述步骤的持续时间为1小时至6天或1至4天。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将权利要求6的所述步骤减至两天。

8.源自人多能干细胞的同步胰腺内胚层细胞群体，其中至少70％的胰腺内胚层细胞为PDX1+/NKX6.1+双阳性。

9.根据权利要求8所述的同步细胞群体，其中所述细胞群体表达少于1％的NKX2.2。

10.根据权利要求8所述的同步细胞群体，其中所述细胞群体表达至少30％的DLK1。

11.根据权利要求8所述的同步细胞群体，其中所述细胞群体进一步表达PTF1a。

12.根据权利要求8-11中任一项所述的同步细胞群体，其用于进一步分化为β细胞，以用作药物。

13.根据权利要求8-11中任一项所述的同步细胞群体，其用于进一步分化为β细胞，以通过向受试者施用干细胞或源自干细胞的组织或器官，或者通过将干细胞或源自干细胞的组织或器官移入受试者中，或者通过将干细胞或源自干细胞的组织或器官移植到受试者中，而用作治疗糖尿病的药物。

14.生物反应器，其包含通过权利要求1-7的方法获得的胰腺内胚层细胞或细胞群体或权利要求8-13的胰腺内胚层细胞群体。

15.用于再生和/或修复和/或构建组织或器官的试剂盒，其中所述试剂盒包括：

(i)通过权利要求1-7的方法获得的胰腺内胚层细胞或细胞群体，或根据权利要求8-13中任一项的同步细胞群体，其用于进一步分化为β细胞，

(ii)生物相容性支架或基质，

(iii)任选地，至少一种生长因子或其功能片段；

(iv)任选地，选自BMP抑制剂、生长因子和/或Rock抑制剂及其组合的药剂；以及

(iv)任选地，关于制备、维持和/或使用所述细胞的说明，所述细胞包括任何细胞培养物或由其衍生的组织或器官。