[发明专利]在植物细胞或整株植物中产生结合物-毒素融合蛋白的方法

权利要求书

1.一种产生结合物-毒素融合蛋白的方法，所述融合蛋白至少包含：

a)选自以下的一种蛋白质结合物

·抗体

·保留靶结合能力的抗体片段或衍生物，或

·抗体模拟物，

b1)可切割肽接头和蛋白质毒素，或

b2)包含可切割结构域的蛋白质原毒素，

所述方法包括以下步骤：

(i)将植物细胞或整株植物宿主与核酸构建体接触，所述核酸构建体至少包含可操作连接的以下：

A)至少一种编码所述蛋白质结合物或其靶结合链或结构域的多核苷酸，以及

B1)编码可切割肽接头的多核苷酸和编码蛋白质毒素的多核苷酸，或

B2)编码蛋白质原毒素的多核苷酸，所述原毒素包含用于其激活的可切割结构域，

(ii)使所述构建体整合到所述植物细胞或所述整株植物的一或多个细胞的核中，和

(iii)表达由所述核酸构建体编码的所述融合蛋白，

其中所述肽接头或原毒素中的可切割结构域不能被植物细胞表达的酶或植物宿主产生的酶切割，

其中所述肽接头或原毒素中的可切割结构域可由哺乳动物细胞表达的酶或哺乳动物宿主产生的酶特异性或非特异性切割。

2.权利要求1的方法，其还包括以下步骤：

(iv)回收和/或纯化步骤(iii)中表达的所述融合蛋白。

3.前述权利要求任一项的方法，其中所述植物或植物细胞来自烟草属(Nicotiana)。

4.权利要求1的方法，其中所述可切割接头或原毒素中的可切割结构域包含选自以下的至少一个切割位点：

a)内体和/或溶酶体蛋白酶切割位点，

b)胞质蛋白酶切割位点，和/或

c)细胞表面蛋白酶切割位点。

5.权利要求1的方法，其中至少一种蛋白质毒素或原毒素是酶。

6.权利要求1的方法，其中所述蛋白质毒素是选自以下的至少一种：

(1)细胞死亡诱导蛋白，

(2)蛋白质合成抑制剂，

(3)膜扰动蛋白，

(4)细胞分裂抑制蛋白。

7.权利要求1的方法，其中至少一种蛋白质毒素是哺乳动物毒素或其保留所述蛋白质毒素毒性活性的片段。

8.权利要求7的方法，其中至少一种蛋白质毒素选自颗粒酶类。

9.权利要求8的方法，其中至少一种蛋白质毒素是颗粒酶B。