[发明专利]用于再生色谱树脂的方法

说明书

本发明提供了改善的再生和使用亲和色谱树脂、特别是蛋白A亲和色谱树脂的方法。

相关申请的引用

本申请要求2019年4月17日提交的美国临时申请号62/835,049的优先权权益，将其通过引用以其整体并入本文。

技术领域

本发明公开的主题总体上涉及色谱法和色谱树脂的清洁。

背景技术

色谱树脂用于从样品溶液中的其他杂质中纯化所希望的蛋白质。此类树脂通常用于通过亲和色谱法纯化生物药物，例如单克隆抗体(Mab)和其他含Fc蛋白。亲和色谱法通过将与目的蛋白特异性结合的配体与树脂偶联而利用蛋白质-配体相互作用，例如能够与抗体的Fc区结合的配体蛋白A。尽管蛋白A亲和色谱法是非常有效的蛋白质纯化方法，但蛋白A树脂的成本大，在MAb制造中占原树脂成本的相当大一部分(Fahrner,R.L.等人,Biotechnol.Appl.Biochem.1999,30,121-128；Kelley,B.,Biotechnol.Prog.2007,23:995-1008)。由于蛋白A树脂的总体性能和结合能力在仅几次纯化循环后迅速降低而使树脂寿命典型地短，进一步加剧了树脂的成本问题。这意味着，典型地，在大规模蛋白质纯化项目中通常需要购买和使用新的蛋白A，从而进一步增加蛋白质纯化的总体成本。树脂性能和结合能力的降低通常是因为从产物和过程两个方面杂质在树脂上积聚而导致的树脂污垢。

因此，需要一种通过延长色谱树脂的总体性能和结合能力、例如通过再生和/或清洁色谱树脂同时保持树脂的完整性来延长色谱树脂寿命的方法。

发明内容

本发明提供了清洁和/或再生色谱树脂的方法。可以清洁和/或再生色谱树脂以用于相同产物或不同产物。

在一个实施方案中，本发明提供了一种清洁色谱树脂的方法，其包括使所述色谱树脂与包含乙酸和苯甲醇的第一缓冲液和包含氢氧化钠、柠檬酸钠和苯甲醇的第二缓冲液接触。在一个实施方案中，所述第一缓冲液不含磷酸。在一个实施方案中，所述第一缓冲液包含约150-200mM乙酸和约1％-3％(v/v)苯甲醇。在一个实施方案中，所述第二缓冲液包含约100-300mM氢氧化钠、约100-300mM柠檬酸钠、和约0.5％-1.5％(v/v)苯甲醇。在一个实施方案中，所述第一缓冲液包含约167mM乙酸。在一个实施方案中，所述第一缓冲液包含约2％(v/v)苯甲醇。在一个实施方案中，所述第二缓冲液包含约200mM氢氧化钠。在一个实施方案中，所述第二缓冲液包含约200mM柠檬酸钠。在一个实施方案中，所述第二缓冲液包含约1％(v/v)苯甲醇。在一个实施方案中，所述第一缓冲液包含约167mM乙酸和约2％(v/v)苯甲醇，并且所述第二缓冲液包含约200mM氢氧化钠、约200mM柠檬酸钠和约1％(v/v)苯甲醇。

在一个实施方案中，所述第一缓冲液包含约167mM乙酸和约2％(v/v)苯甲醇，并且所述第二缓冲液包含约100mM氢氧化钠、约200mM柠檬酸钠和约1％(v/v)苯甲醇。

在一个实施方案中，在所述第一缓冲液之前并且在所述第二缓冲液之后，使中和缓冲液通过所述色谱树脂。

在一个实施方案中，将所述色谱树脂在所述第一缓冲液中保持约15分钟或更少。在一个实施方案中，将所述色谱树脂在所述第二缓冲液中保持约15分钟或更少。在一个实施方案中，将所述色谱树脂在所述第二缓冲液中保持约45分钟或更少。在一个实施方案中，在所述清洁在同一天进行重复使用。

在一个实施方案中，所述色谱树脂驻留在色谱柱中。

在一个实施方案中，所述色谱树脂是亲和树脂。在一个实施方案中，所述色谱树脂包含与支持物偶联的亲和配体。在一个实施方案中，所述亲和配体是葡萄球菌(Staphylococcus)蛋白A或其部分或衍生物。在一个实施方案中，所述亲和配体是葡萄球菌蛋白G或其部分或衍生物。在一个实施方案中，所述树脂或支持物包括选自多糖、琼脂糖、聚乙烯醚、聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酸酯、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺和聚碳酸酯或其混合物的聚合物。