[发明专利]CRISPR/CAS融合蛋白和系统

权利要求书

1.一种融合蛋白，其包含连接至至少一个标记蛋白的Cas9蛋白。

2.权利要求1的融合蛋白，其中所述至少一个标记蛋白通过化学键直接地、直接地或通过接头间接地、或其组合连接至所述Cas9蛋白。

3.权利要求1的融合蛋白，其中所述至少一个标记蛋白直接地或通过接头间接地连接至所述Cas9蛋白。

4.权利要求1至3中任一项的融合蛋白，其中所述至少一个标记蛋白连接至所述Cas9蛋白的N末端、C末端、内部位置或它们的组合。

5.权利要求1至4中任一项的融合蛋白，进一步包含至少一个核定位信号。

6.权利要求5的融合蛋白，其中所述核定位信号、标记蛋白、接头和Cas9蛋白按以下顺序(N末端至C末端)排列：

标记蛋白-接头-核定位信号-Cas9蛋白；

标记蛋白-核定位信号-接头-Cas9蛋白；

核定位信号-接头-标记蛋白-Cas9蛋白；

核定位信号-标记蛋白-接头-Cas9蛋白；

标记蛋白-接头-核定位信号-接头-Cas9蛋白；或

核定位信号-接头-标记蛋白-接头-Cas9蛋白。

7.权利要求6的融合蛋白，其中所述核定位信号、标记蛋白、接头和Cas9蛋白按以下顺序(N末端至C末端)排列：

标记蛋白-接头-核定位信号-Cas9蛋白。

8.权利要求1至7中任一项的融合蛋白，进一步包含至少一个异源结构域。

9.权利要求8的融合蛋白，其中所述至少一个异源结构域为细胞穿透结构域、染色质调控基序、表观遗传修饰结构域、转录调节结构域、RNA适体结合结构域或其组合。

10.权利要求1至9中任一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白是核酸酶并切割双链序列的两条链，是切口酶并切割双链序列的一条链，或没有核酸酶或切口酶活性。

11.权利要求1至10中任一项的融合蛋白，其中所述cas9蛋白来自酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、金黄葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)。

12.权利要求1至11中任一项的融合蛋白，其中所述标记蛋白具有与SEQ ID NO：19或20有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

13.权利要求1至11中任一项的融合蛋白，其中所述标记蛋白具有阐明于SEQ ID NO：19或20的氨基酸序列。

14.权利要求3至13中任一项的融合蛋白，其中所述接头具有与SEQ ID NO：35或36有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

15.权利要求3至13中任一项的融合蛋白，其中所述接头具有阐明于SEQ ID NO：35或36的氨基酸序列。

16.权利要求3至15中任一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白具有与SEQ ID NO：48、49或50有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

17.权利要求3至15中任一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白具有如阐明于SEQ ID NO：48、49或50的氨基酸序列。