[发明专利]用于分离和表征由化学诱变产生的泌铵突变体库的高通量方法

权利要求书

1.一种生物传感器，其能够检测组合物中铵的存在，所述生物传感器包括包含以下的细菌：

a)编码报告分子的核酸序列，

b)选自可操作地连接至(a)的所述核酸序列的Nif调节子的启动子或其片段，

c)编码抑制性固氮调节蛋白的核酸序列，和

d)编码正固氮调节蛋白的核酸序列；其中所述细菌在不存在铵的情况下表达所述报告分子。

2.如权利要求1所述的生物传感器，其中所述报告分子是荧光蛋白、功能片段和/或其融合物。

3.如权利要求2所述的生物传感器，其中所述荧光蛋白是GFP、RFP、YFP、CFP或其功能变体或片段。

4.如权利要求3所述的生物传感器，其中所述荧光蛋白是GFP。

5.如权利要求4所述的生物传感器，其中所述GFP是超折叠GFP。

6.如上述权利要求中任一项所述的生物传感器，其中所述启动子或其片段选自nifHDK操纵子。

7.如权利要求1-5中任一项所述的生物传感器，其中所述启动子是nifH启动子。

8.如权利要求1所述的生物传感器，其中所述抑制性固氮调节蛋白是NifL。

9.如权利要求1所述的生物传感器，其中所述正固氮调节蛋白是NifA。

10.如权利要求1所述的生物传感器，其中所述细菌是大肠杆菌。

11.一种检测组合物中铵的存在的方法，所述方法包括：

a)用生物传感器接种组合物，其中所述生物传感器包括包含以下的细菌：

i)编码报告分子的核酸序列，

ii)选自可操作地连接至(i)的所述核酸序列的Nif调节子的启动子或其片段，

iii)编码抑制性固氮调节蛋白的核酸序列，和

iv)编码正固氮调节蛋白的核酸序列；其中所述细菌在不存在铵的情况下表达所述报告分子；

b)将经接种的组合物暴露于足以激活所述报告分子的刺激；和

c)在(b)之后检测与对照组合物相比所述经接种的组合物的报告分子输出。

12.如权利要求11所述的方法，所述方法还包括基于检测的报告分子输出量化所述组合物中铵的量。

13.如权利要求11或12所述的方法，其中所述刺激选自由化学刺激、物理刺激、遗传刺激和能量刺激组成的组。

14.如权利要求11-12中任一项所述的方法，其中所述刺激是光。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述报告分子是荧光蛋白、功能片段和/或其融合物。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述荧光蛋白是GFP、RFP、YFP、CFP或其功能变体或片段。

17.如权利要求15所述的方法，其中所述荧光蛋白是GFP。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述GFP是超折叠GFP。

19.如权利要求15所述的方法，其中步骤(b)需要将所述经接种的组合物暴露于足以使所述荧光蛋白、功能片段和/或其融合物发荧光的光激发。

20.如权利要求15所述的方法，其中步骤(c)需要在(b)之后检测与所述对照组合物相比所述经接种的组合物的荧光输出强度。