[发明专利]间质干细胞的非病毒修饰

权利要求书

1.一种用从中表达一种或多种功能基因的核酸构建体转染的间质干细胞(MSC)，所述MSC具有通过所述核酸构建体的转染基本无变化的多能性表型，并且所述MSC不含基于病毒的转染载体材料。

2.多种间质干细胞(MSC)，其中，至少约60％的所述MSC用从中表达一种或多种功能基因的核酸构建体转染，转染的所述一种或多种MSC具有通过所述核酸构建体的转染基本无变化的多能性表型，并且所述MSC不含基于病毒的转染载体材料。

3.根据权利要求1或2所述的一种或多种MSC，其中，转染的所述一种或多种MSC各自用平均至少约1000、至少约2000、至少约3000、至少约4000、至少约5000、至少约6000、至少约7000、至少约8000、至少约9000或至少约10000拷贝的所述核酸构建体转染。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的一种或多种MSC，其中，转染的所述一种或多种MSC在转染后瞬时表达所述一种或多种功能基因至少约7天、至少约8天、至少约9天、至少约10天、至少约11天、至少约12天、至少约13天、至少约14天、至少约15天、至少约16天、或至少约17天。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的一种或多种MSC，其中，转染的所述一种或多种MSC使用阳离子聚合物、能够重定向来自胞内酸性区室的内吞核酸的第一试剂和能够稳定所述一种或多种MSC的微管网络的第二试剂，用所述核酸构建体转染。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的一种或多种MSC，其中，所述一种或多种功能基因包括自杀基因。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的一种或多种MSC，其中，所述一种或多种功能基因包含胞嘧啶脱氨酶(CDy)、尿嘧啶转磷酸核糖基酶(UPRT)、或两者。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的一种或多种MSC，其中，所述多能性表型包括所述MSC的肿瘤和/或癌症趋向性。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的一种或多种MSC，用于在治疗癌症，例如，淋巴瘤、明细胞癌、成胶质细胞瘤、替莫唑胺耐受性成胶质细胞瘤、肛周癌、口腔黑素瘤、甲状腺癌、软组织癌、癌症溃疡、鼻肿瘤或胃肠癌中的使用。

10.根据权利要求9所述的用于使用的一种或多种MSC，其中，所述一种或多种MSC用于与5FC、5FU、GCV或它们的任意组合进行组合使用。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的一种或多种MSC，其中，所述多能性表型包括其中在转染后CD表面标志物的表达基本无变化的免疫表型，优选地其中，转染的所述一种或多种MSC是塑料-附着的，表达CD105、CD73和CD90(95％)，缺乏CD45、CD34、CD14和HLA-DR表面分子的表达(2％)，并且能够体外分化为成骨细胞、脂肪细胞和成软骨细胞，从而满足国际细胞疗法协会(ISCT)所定义的免疫表型标准。

12.一种用从中表达一种或多种功能基因的核酸构建体转染间质干细胞(MSC)的方法，所述方法包括：

将所述MSC暴露于包含与阳离子聚合物复合的核酸构建体的转染混合物；

将所述MSC暴露于能够重定向来自胞内酸性区室的内吞核酸的第一试剂和能够稳定所述MSC的微管网络的第二试剂；和

温育所述MSC；

由此提供用所述核酸构建体转染的MSC。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，在暴露于所述转染混合物期间、在暴露于所述第一试剂和所述第二试剂期间、在温育期间或它们的任意组合期间，不对所述多种MSC离心。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其中，温育所述MSC的步骤包括将所述MSC温育约2小时至约48小时。