[发明专利]用于生产3-羟基己二酸、α-氢化己二烯二酸和/或己二酸的基因修饰微生物以及该化学品的制造方法

权利要求书

1.一种基因修饰微生物，其中，导入对以下(a)～(c)中任意一项所述的多肽进行编码的核酸、或者增强该多肽的表达，并且使丙酮酸激酶的功能受损：

(a)由序列号1～7的任意一个氨基酸序列构成的多肽；

(b)在序列号1～7的任意一个氨基酸序列中1个或多个氨基酸发生置换、缺失、插入和/或添加后的氨基酸序列构成的、并且具有对将3-氧代己二酰-CoA还原生成3-羟基己二酰-CoA的反应进行催化的酶活性的多肽；

(c)相对于序列号1～7的任意一个氨基酸序列具有70％以上的序列同源性，并且具有对将3-氧代己二酰-CoA还原生成3-羟基己二酰-CoA的反应进行催化的酶活性的多肽。

2.根据权利要求1所述的基因修饰微生物，其中，

选自所述(b)和(c)的多肽包含由序列号173的氨基酸序列构成的区域。

3.根据权利要求2所述的基因修饰微生物，其中，

在所述序列号173的氨基酸序列中，从N末端侧起第13个氨基酸残基为苯丙氨酸或亮氨酸，从N末端侧起第15个氨基酸残基为亮氨酸或谷氨酰胺，从N末端侧起第16个氨基酸残基为赖氨酸或天冬酰胺，从N末端侧起第17个氨基酸残基为甘氨酸或丝氨酸，从N末端侧起第19个氨基酸残基为脯氨酸或精氨酸，从N末端侧起第21个氨基酸残基为亮氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸。

4.根据权利要求1至3中任意1项所述的基因修饰微生物，

其是选自由大肠杆菌属、沙雷氏菌属、哈夫尼菌属以及假单胞菌属构成的组中的微生物的基因修饰体。

5.根据权利要求1至4中任意1项所述的基因修饰微生物，具有：

从乙酰-CoA和琥珀酰-CoA生成3-氧代己二酰CoA和辅酶A的能力，以及从3-羟基己二酰-CoA生成3-羟基己二酸的能力。

6.根据权利要求1至4中任意1项所述的基因修饰微生物，具有：

从乙酰-CoA和琥珀酰-CoA生成3-氧代己二酰CoA和辅酶A的能力，从3-羟基己二酰-CoA生成2,3-脱氢己二酰-CoA的能力，以及从2,3-脱氢己二酰-CoA生成α-氢化己二烯二酸的能力。

7.根据权利要求1至4中任意1项所述的基因修饰微生物，具有：

从乙酰-CoA和琥珀酰-CoA生成3-氧代己二酰CoA和辅酶A的能力，从3-羟基己二酰-CoA生成2,3-脱氢己二酰-CoA的能力，从2,3-脱氢己二酰-CoA生成己二酰-CoA的能力，以及从己二酰-CoA生成己二酸的能力。

8.根据权利要求1至7中任意1项所述的基因修饰微生物，

进一步使磷酸转移酶类酶的功能受损。

9.一种3-羟基己二酸的制造方法，包括：

将根据权利要求1至5以及8中任意1项所述的基因修饰微生物在含有碳源作为发酵原料的培养基中进行培养。

10.一种α-氢化己二烯二酸的制造方法，包括：

将根据权利要求1至4、6以及8中任意1项所述的基因修饰微生物在含有碳源作为发酵原料的培养基中进行培养。

11.一种己二酸的制造方法，包括：

将根据权利要求1至4、7以及8中任意1项所述的基因修饰微生物在含有碳源作为发酵原料的培养基中进行培养。

12.一种选自由3-羟基己二酸、α-氢化己二烯二酸以及己二酸构成的组中的1种以上的物质的制造方法，包括：

将基因修饰微生物在含有碳源作为发酵原料的培养基中进行培养，其中该基因修饰微生物是在沙雷氏菌属微生物中导入对由构成5-氨基乙酰丙酸合酶基因和基因簇的3-羟基丁酰-CoA脱氢酶基因编码的多肽进行编码的核酸、或者增强该多肽的表达，并且使丙酮酸激酶的功能受损。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，

所述基因修饰微生物是进一步使磷酸转移酶类酶的功能受损的微生物。