[发明专利]ASX特异性蛋白质连接酶及其用途

权利要求书

1.分离多肽，其具有蛋白质连接酶、优选环化酶活性，其包含或由以下组成：

(v)SEQ ID NO：1(VyPAL2)中列出的氨基酸序列；

(vi)与SEQ ID NO：1中列出的氨基酸序列在其整个长度上具有至少60％，优选至少70％，更优选至少80％，最优选至少90％序列同一性的氨基酸序列；

(vii)与SEQ ID NO：1中列出的氨基酸序列在其整个长度上具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％序列同源性的氨基酸序列；或者

(viii)(i)-(iii)中的任一片段。

2.如权利要求1所述的分离多肽，其中所述分离多肽包含或由以下组成：

(i)SEQ ID NO：2(VyPAL2+N端+Cap剩余部分)或SEQ ID NO：3(VyPAL2酶原)中列出的氨基酸序列；

(ii)与SEQ ID NO：2或3中列出的氨基酸序列在其整个长度上具有至少60％，优选至少70％，更优选至少80％，最优选至少90％序列同一性的氨基酸序列；

(iii)与SEQ ID NO：2或3中列出的氨基酸序列在其整个长度上具有至少80％，优选至少90％，更优选至少95％序列同源性的氨基酸序列；或者

(iv)(i)-(iii)中的任一片段。

3.如权利要求1或2所述的分离多肽，其中所述多肽包含：

(i)在对应于SEQ ID NO：1的19位的位置处的氨基酸残基N；和/或

(ii)在对应于SEQ ID NO：1的124位的位置处的氨基酸残基H；和/或

(iii)在对应于SEQ ID NO：1的166位的位置处的氨基酸残基C。

4.如权利要求1或2所述的分离多肽，其中所述多肽包含：

(i)在对应于SEQ ID NO：1的126位的位置处的氨基酸残基A，以及任选地，在对应于127位的位置处的氨基酸A或P，优选P(LAD2)；和/或

(ii)在对应于SEQ ID NO：1的126位的位置处的氨基酸残基G和在对应于127位的位置处的氨基酸A(LAD2)；

(iii)在对应于SEQ ID NO：1的195位的位置处的氨基酸残基W或Y，在对应于196位的位置处的氨基酸残基I或V，在对应于197位的位置处的氨基酸残基T、A或V(LAD1)；

(iv)在对应于SEQ ID NO：1的21位的位置处的氨基酸残基R，在对应于22位的位置处的H，在对应于123位的位置处的D，在对应于164位的位置处的E，在对应于194位的位置处的S，在对应于215位的位置处的D(S1口袋)；和/或

(v)在对应于SEQ ID NO：1的199位和212位的位置处的氨基酸残基C(二硫桥)。

5.如权利要求1-4中任一项所述的分离多肽，其中所述多肽可通过在5.0或更低的pH值下进行酸处理而活化，优选4.0或更低的pH值。

6.如权利要求1-5中任一项所述的分离多肽，其中所述多肽可以

(i)以60％或更高，优选80％或更高的效率，优选在5.5或更高的pH值下环化给定的肽；和/或

(ii)以20％或更低，优选5％或更低的效率，优选在5.5或更高的pH值下水解给定的肽。

7.如权利要求1至6中任一项所述的分离多肽，其中所述多肽是糖基化的。

8.编码根据权利要求1至6中任一项所述的多肽的核酸分子。

9.如权利要求8所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含在载体中。

10.如权利要求9所述的核酸分子，其中所述载体进一步包含用于控制所述核酸分子表达的调节元件。

11.包含如权利要求8至10中任一项所述的核酸分子的宿主细胞，其中所述宿主细胞优选为昆虫细胞，更优选为Sf9细胞。