[发明专利]增加细胞对补体介导裂解的敏感性的方法

权利要求书

1.一种患者体内移植供体器官反应性抗体的检测方法，所述方法包括以下步骤：

(a)通过对动物或人类器官的细胞群进行遗传修饰，减少至少一种补体抑制剂的表达；

(b)将遗传修饰的细胞群与从期望接受移植供体器官的患者分离出的血清样本接触；以及

(c)检测所述遗传修饰的细胞群的裂解，其中，裂解指示期望接受所述移植供体器官的所述患者是否表达供体器官反应性抗体，其中，当与来自所述器官且未经遗传修饰的细胞群比较时，所述裂解可被检测或增加，以减少至少一种表达的补体抑制剂。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述细胞群来自候选移植器官。

3.如权利要求1所述的方法，其中，所述细胞群是供体淋巴细胞。

4.如权利要求1所述的方法，其中，所述细胞群来自肾脏。

5.如权利要求4所述的方法，其中，所述细胞群是肾内皮细胞。

6.如权利要求1所述的方法，其中，步骤(a)还包括：

(i)从所述器官获得组织样本；以及

(ii)产生遗传修饰的器官衍生细胞群，该器官衍生细胞群包括通过用至少一种编码向导RNA和CRISPR Cas9的表达载体转染所述细胞而产生的非活性补体抑制剂编码基因，其中，所述向导RNA对补体抑制剂具有特异性。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述非活性补体抑制剂编码基因选自CD46类、CD46、CD55和CD59。

8.如权利要求6所述的方法，其中，所述补体抑制剂是CD46类，其核苷酸序列编码与SEQID NO：19的核苷酸序列具有至少90％的相似性。

9.如权利要求6所述的方法，其中，所述补体抑制剂是CD46类，其氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID NO：23具有至少90％的相似性。

10.如权利要求1所述的方法，其中，所述使非活性补体抑制剂编码基因失活的向导RNA包括从SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3；SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：11组成的组中选择的核苷酸序列，以及从SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：6、SEQ IDNO：8、SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12组成的组中选择的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

11.如权利要求9所述的方法，其中，所述补体抑制剂是CD46类，并且在生理条件下，与SEQ ID NO：19序列或其补体杂交并基于CRISPR Cas9失活的向导RNA具有SEQ ID NO：20核苷酸序列。

12.如权利要求6所述的方法，其中，所述表达载体是质粒PX330或PX458，并且当所述质粒转染到哺乳动物细胞中时，所述表达质粒表达Cas9。

13.如权利要求6所述的方法，其中，所述表达载体包括与从SEQ ID NO：13至SEQ IDNO：18组成的组中选择的核苷酸序列具有至少85％相似性的核苷酸序列。