[发明专利]用于通过基因沉默的有害生物防治的数个植物细胞中的dsRNA的产生

权利要求书

1.一种产生能够沉默一有害生物基因的一植物细胞中的一长dsRNA分子的方法，其特征在于：所述方法包括：

(a)在一植物基因组中选择一核酸序列，所述核酸序列编码一沉默分子，所述沉默分子以一植物基因作为一目标，所述沉默分子能够募集RNA依赖型RNA聚合酶RdRp；

(b)修饰所述植物基因的一核酸序列，从而针对所述有害生物基因赋予一沉默特异性，使得包括所述沉默特异性的所述植物基因的一转录物与能够募集所述RdRp的所述沉默分子形成碱基互补，以产生能够沉默所述有害生物基因的所述长dsRNA分子，

从而产生能够沉默所述有害生物基因的所述植物细胞中的所述长dsRNA分子。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：能够募集所述RdRp的所述沉默分子包括21至24个核苷酸。

3.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其特征在于：能够募集所述RdRp的所述沉默分子选自由:反式作用siRNA、定相小干扰RNA、微小RNA、小干扰RNA、短发夹RNA、Piwi相互作用RNA、转运RNA、小核RNA、核醣体RNA、小核仁RNA、细胞外RNA、重复衍生RNA、自主及非自主转座RNA所组成的群组。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述微小RNA包括具有22个核苷酸的一成熟小RNA。

5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述微小RNA选自由：miR-156a、miR-156c、miR-162a、miR-162b、miR-167d、miR-169b、miR-173、miR-393a、miR-393b、miR-402、miR-403、miR-447a、miR-447b、miR-447c、miR-472、miR-771、miR-777、miR-828、miR-830、miR-831、miR-831、miR-833a、miR-833a、miR-840、miR-845b、miR-848、miR-850、miR-853、miR-855、miR-856、miR-864、miR-2933a、miR-2933b、miR-2936、miR-4221、miR-5024、miR-5629、miR-5648、miR-5996、miR-8166、miR-8167a、miR-8167b、miR-8167c、miR-87e6187d、miR-8167f、miR-8177及miR-8182所组成的群组。

6.如权利要求1至5任一项所述的方法，其特征在于：所述植物基因是一非蛋白质编码基因。

7.如权利要求1至6任一项所述的方法，其特征在于：所述植物基因编码针对一天然植物基因具有一内在沉默活性的一分子。

8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其特征在于：步骤(b)的所述修饰包括将一DNA编辑剂引入所述植物细胞中，所述DNA编辑剂将所述植物基因的一沉默特异性重定向至针对所述有害生物基因，所述有害生物基因及一天然植物基因是不同的。

9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于：具有所述内在沉默活性的所述植物基因选自由:反式作用siRNA、定相小干扰RNA、微小RNA、小干扰RNA、短发夹RNA、Piwi相互作用RNA、转运RNA、小核RNA、核醣体RNA、小核仁RNA、细胞外RNA、自主及非自主转座RNA所组成的群组。

10.如权利要求7至9中任一项所述的方法，其特征在于：具有所述内在沉默活性的所述植物基因编码一定相二级siRNA产生分子。

11.如权利要求7至9任一项所述的方法，其特征在于：具有所述内在沉默活性的所述植物基因是一反式作用siRNA生成分子。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其特征在于：所述植物基因的所述沉默特异性通过测量所述有害生物基因的一转录水平来确定。