[发明专利]使用DNA结合阻遏物在原核细胞中的转录控制

权利要求书

1.一种将基因线路从供体细胞转移到靶细胞的方法，其包括使供体细胞与靶细胞接触足够量的时间，以允许所述基因线路转移到靶细胞内，其中所述供体细胞表达阻遏蛋白，所述阻遏蛋白并不由所述基因线路编码并且不存在于靶细胞中，并且其中所述基因线路包含在阻遏物结合序列的转录控制下的目的核酸序列。

2.权利要求1的方法，其中所述供体细胞是细菌供体细胞，并且所述靶细胞是细菌靶细胞。

3.权利要求1或2的方法，其中所述基因线路在转移前在细菌递送媒介物内进行包装。

4.权利要求3的方法，其中在递送媒介物中包装的所述基因线路是包装的噬菌粒。

5.权利要求1至4中任一项的方法，其中所述目的核酸序列编码目的蛋白质和/或目的RNA分子。

6.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述目的核酸序列编码目的蛋白质。

7.权利要求6的方法，其中所述目的蛋白质是毒性蛋白。

8.权利要求7的方法，其中所述毒性蛋白对细菌细胞，优选对所述靶细胞是毒性的。

9.权利要求6至8任一项的方法，其中所述蛋白质是核酸酶，优选CRISPR核酸酶。

10.权利要求7或8的方法，其中所述毒性蛋白选自穿孔素、内溶素、限制性酶或影响靶细胞存活或生长的毒素。

11.权利要求6至10中任一项的方法，其中所述目的蛋白质是治疗性蛋白质。

12.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述目的核酸序列编码目的RNA分子。

13.权利要求12的方法，其中所述目的RNA分子选自mRNA、crRNA、tRNA、iRNA、asRNA、核酶RNA、引导RNA和RNA适体。

14.权利要求12的方法，其中所述目的RNA分子是asRNA。

15.权利要求12的方法，其中所述目的RNA分子是引导RNA。

16.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述目的核酸序列编码CRISPR核酸酶，并且所述基因线路进一步包含编码引导RNA的核酸序列。

17.权利要求16的方法，其中编码引导RNA的所述核酸序列处于组成型启动子的转录控制下。

18.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述目的核酸序列是编码RNA例如mRNA、crRNA、tRNA、iRNA (干扰RNA)、asRNA (反义RNA)、核酶RNA、RNA适体或引导RNA的核酸，CRISPR基因座，毒素基因，编码酶例如核酸酶或激酶的基因，编码选自Cas核酸酶、Cas9核酸酶、TALEN、ZFN和大范围核酸酶的核酸酶的基因，编码重组酶、细菌受体、膜蛋白、结构蛋白或分泌蛋白的基因，编码对抗生素或一般而言的药物的抗性的基因，编码毒性蛋白或毒性因子的基因，以及编码毒力蛋白或毒力因子的基因，或其任何组合。

19.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述目的核酸序列选自编码下述中的一种或多种的核酸：Cas核酸酶、Cas9核酸酶、引导RNA、CRISPR基因座、毒素、酶、核酸酶、激酶、TALEN、ZFN、大范围核酸酶、重组酶、细菌受体、膜蛋白、结构蛋白、分泌蛋白、赋予对抗生素或药物的抗性的蛋白质、毒性蛋白或毒性因子、毒力蛋白和毒力因子。