[发明专利]改进的λ抗体

说明书

适合用非天然N‑末端信号肽表达的免疫球蛋白λ可变结构域序列，在IMGT第1位处存在缺失。

技术领域

本发明涉及抗体λ(λ)轻链可变(VL)结构域和包含它们的抗体(λ抗体)。本发明还涉及在重组宿主细胞中由工程化核酸表达λ抗体。

背景技术

单克隆抗体是成功的和正在扩大的一类生物药物。目前临床使用的大多数抗体是IgG免疫球蛋白，其包含两对二硫键连接的重链和轻链多肽链。在天然人抗体中，有两类抗体轻链，κ(κ)和λ(λ)，因此IgG可以是IgGκ或IgGλ，这取决于轻链是否是通过发育中的B淋巴细胞中免疫球蛋白κ或λ轻链基因座的重排产生的。在人体中，发现IgGκ和IgGλ的量大致相等(55％κ；45％λ)。然而，开发用于人类临床应用的大多数抗体是IgGκ抗体，其中相对少的λ抗体已经在生产中。

单克隆抗体的主要生产方法是在体外培养的宿主细胞中重组表达编码抗体重链和轻链的核酸。在典型的生产系统中，抗体重链和轻链被共翻译并从宿主细胞分泌。

已经通过改变重组系统的许多不同方面努力增加多肽表达，因为更高的抗体产量提高了生产效率并降低了生产成本。

分泌途径中一个已知的瓶颈是抗体多肽通过信号肽转运到内质网(ER)的内腔中。信号肽是抗体重链和轻链N-末端的短(15-30个氨基酸)序列，其指导其转运，并且在转运过程中被切割，因此不是分泌的成熟多肽链的一部分。已经努力寻找产生更高抗体产量的信号肽。

除了它们在分泌效率中的作用之外，信号肽还与切割异质性(cleavageheterogeneity)的工业问题有关，所述切割异质性是由于信号肽的非特异性切割而发生的。这种现象可能导致重链和轻链N-末端的延长或截短，这可能不适合于生物药物治疗，并且可能改变抗体亲和力。修饰的信号肽还被报道调节它们所搭载蛋白的折叠、热力学稳定性和聚集倾向。最近Gupta等(BiotechnolAdv 2019)综述了信号肽和其它变量在单克隆抗体生产中的作用。

RanceYoung(Evaluation of Alternative Signal Sequences,in T.Noll(ed.),Cells and Culture,ESACT Proceedings 4,271DOI 10.1007/978-90-481-3419-9_47；WO2008/148519Lonza)评价了在瞬时表达系统和稳定细胞系中关于抗体产生的19个信号序列。抗体基因被设计为包括通常用于Lonza的信号序列或19种替代序列(V1-V19)。他们鉴定了许多信号序列，据报道当用于哺乳动物宿主细胞中的表达盒时，所述信号序列提供了有效连接的多肽序列的正确加工和有效分泌，包括本发明表P中所示的V12、V14、V16和V19。据说V19和V17与使用常规使用的信号序列的对照细胞系相比，平均抗体浓度发生了特别强烈的增加。

Kotia和Raghani(Anal Biochem 399190-1952010)记载了由于在CHO细胞中表达的单克隆抗体的重链和轻链中信号肽的切割位点不同，单克隆抗体中存在异质性。

Haryadi等(PLoS ONE 10(2)：e01168782015)优化了五种最流行单克隆抗体的信号肽序列。与天然信号肽相比，利妥昔单抗的信号肽的优化物导致滴度增加两倍。