[发明专利]包含microRNA适应的shRNA(shRNAmiR)的遗传修饰的免疫细胞

权利要求书

1.一种遗传修饰的人T细胞，其在基因组中包含盒，所述盒从5’至3’包含：

(a)启动子；

(b)编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列；

(c)2A序列；

(d)编码HLA I类组织相容性抗原α链E(HLA-E)融合蛋白的核酸序列，其中所述HLA-E融合蛋白包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列，并且其中内含子序列位于编码所述HLA-E融合蛋白的所述核酸序列内，其中所述内含子序列包含SEQ ID NO:69的核酸序列，并且其中编码microRNA适应的shRNA(shRNAmiR)的核酸序列位于所述内含子序列内，其中编码所述shRNAmiR的所述核酸序列包含SEQ ID NO:46的核酸序列 ；和

(e)终止信号；

其中编码所述CAR的所述核酸序列、编码所述HLA-E融合蛋白的所述核酸序列和编码所述shRNAmiR的所述核酸序列与所述启动子可操作地连接，

并且其中所述盒位于T细胞受体(TCR)α恒定区基因内。

2.根据权利要求1所述的遗传修饰的人T细胞，其中所述盒在所述TCRα恒定区基因内位于由SEQ ID NO:58组成的序列内。

3.根据权利要求2所述的遗传修饰的人T细胞，其中所述盒位于SEQ ID NO:58的核苷酸位置13和14之间。

4.一种遗传修饰的人T细胞，其在基因组中包含盒，所述盒从5’至3’包含：

(a)包含SEQ ID NO:67的核酸序列的启动子；

(b)编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列，其中所述CAR包含信号肽，所述信号肽包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；

(c)包含SEQ ID NO:70的核酸序列的P2A/弗林蛋白酶位点；

(d)编码HLA I类组织相容性抗原α链E(HLA-E)融合蛋白的核酸序列，其中所述HLA-E融合蛋白包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列，并且其中内含子序列位于编码所述HLA-E融合蛋白的所述核酸序列内，其中所述内含子序列包含SEQ ID NO:69的核酸序列，并且其中编码降低内源性β-2微球蛋白表达的microRNA适应的shRNA(shRNAmiR)的核酸序列位于所述内含子序列内，其中编码所述shRNAmiR的所述核酸序列包含SEQ ID NO:46的核酸序列 ；和

(e)包含SEQ ID NO:68的核酸序列的终止信号；

其中编码所述CAR的所述核酸序列、编码所述HLA-E融合蛋白的所述核酸序列和编码所述shRNAmiR的所述核酸序列与所述启动子可操作地连接，

并且其中所述盒位于T细胞受体(TCR)α恒定区基因内。

5.根据权利要求4所述的遗传修饰的人T细胞，其中所述盒在所述TCRα恒定区基因内位于由SEQ ID NO:58组成的序列内。

6.根据权利要求5所述的遗传修饰的人T细胞，其中所述盒位于SEQ ID NO:58的核苷酸位置13和14之间。

7.一种遗传修饰的人T细胞，其在基因组中包含盒，所述盒包含SEQ ID NO:74的核酸序列，其中所述盒位于T细胞受体(TCR)α恒定区基因内。

8.根据权利要求7所述的遗传修饰的人T细胞，其中所述盒在所述TCRα恒定区基因内位于由SEQ ID NO:58组成的序列内。

9.根据权利要求8所述的遗传修饰的人T细胞，其中所述盒位于SEQ ID NO:58的核苷酸位置13和14之间。