[发明专利]皂苷纯化

说明书

公开了含有通过214nm处的紫外吸光度确定的至少88％QS‑21主峰和3％至10％的2018组分的皂苷提取物、制备所述提取物的方法、其作为疫苗佐剂的用途和相关方面。

技术领域

本申请总体上涉及皂苷提取物，特别是皂树(Quillaja saponaria Molina)的提取物，其制备方法和相关方面。

背景技术

疫苗中包含佐剂以改善体液和细胞免疫反应，特别是在较差免疫原性的亚单位疫苗的情况下。类似于病原体的自然感染，佐剂依靠先天免疫系统的激活来促进持久的适应性免疫。

佐剂系统01(AS01)是一种基于脂质体的佐剂，其包含两种免疫刺激剂，3-O-去酰基-4'-单磷酰脂质A(3D-MPL)和QS-21(Garcon and Van Mechelen,2011；Didierlaurentet al.,2017)。3D-MPL是一种来自明尼苏达沙门氏菌(Salmonella minnesota)的脂多糖的无毒衍生物(其是一种TLR4激动剂)，而QS-21是一种来自南美树木皂树树皮的天然皂苷提取物(Kensil et al.,1991；Ragupathi et al.,2011)。AS01包含在最近开发的疟疾疫苗(RTS,S-Mosquirix^TM)和带状疱疹(Herpes zoster)疫苗(HZ/su-Shingrix^TM)中，以及针对人类免疫缺陷病毒和结核分枝杆菌等病原体开发的多种候选疫苗中。

AS01注射在动物模型中导致先天免疫的快速和瞬时激活。免疫接种后，嗜中性粒细胞和单核细胞迅速募集到引流淋巴结(dLN)。此外，AS01诱导MHCII^高树突细胞(DC)的募集和激活，这是T细胞激活所必需的(Didierlaurent A.M.et al.,2014)。关于AS01组分的作用机制的一些数据也是可得的。3D-MPL通过TLR4发出信号，从而刺激NF-KB转录活性和细胞因子的产生，并直接激活人类和小鼠中的抗原呈递细胞(APC)(De Becker et al.,2000；Ismaili et al.,2002；Martin et al.,2003；Mata-Haro et al.,2007)。QS-21促进小鼠中的高抗原特异性抗体反应和CD8+T细胞反应(Kensil和Kammer,1998；Newman et al.,1992；Soltysik et al.,1995)和人类中的抗原特异性抗体反应(Livingston et al.,1994)。由于其物理特性，人们认为QS-21可能在体内充当危险信号(Lambrecht et al.,2009；Li etal.,2008)。尽管QS-21已被证明激活ASC-NLRP3炎性体和随后的IL-1β/IL-18释放(Marty-Roix,R.et al.,2016)，但涉及皂苷佐剂作用的确切分子途径尚未明确。

与被批准用作人类药物的产品的任何组分一样，QS-21的生产需要使用经批准的制造工艺并仔细控制最终组成，以确保其符合安全有效的规范。现有工艺的修改需要昂贵且耗时的重新验证，而偏离规范也会导致废品。用于制造QS-21和确定成分的QS-21材料的稳健方法是被持续需要的。

市售AS01中包含的QS-21皂苷提取物目前含有3％或更少的三萜糖苷组分(称为2018组分)。本发明人已经观察到具有更高百分比的2018组分的QS-21皂苷提取物显示出类似的生物活性特征。

发明内容

本发明提供了一种皂苷提取物，其包含通过214nm的紫外吸光度确定的(i)至少88％的QS-21主峰和(ii)3至10％的2018组分。

还提供了一种皂苷提取物，其含有(i)通过214nm的紫外吸光度确定的至少为88％的负离子电喷雾质谱m/z为1855.9、1987.9或2001.9的三萜糖苷，以及(ii)通过214nm的紫外吸光度确定的3至10％的m/z为2017.9的三萜糖苷。

此外，提供了一种皂苷提取物，其含有通过214nm的紫外吸光度确定的(i)至少88％的：