[发明专利]每液滴多个珠的解决方案

权利要求书

1.一种检测分区中多种条码化固体支持物存在的方法，所述方法按以下顺序包括：

a)提供多个分区，其中至少一些分区包含多个固体支持物，每个固体支持物连接至不同的固体支持物寡核苷酸，所述固体支持物寡核苷酸包含对于所述固体支持物独特的条形码；

b)合成所述寡核苷酸的互补序列以产生具有来自两种所述固体支持物寡核苷酸的条形码的双链多核苷酸；

c)测序所述双链多核苷酸的一条或两条链，其中包含两种不同条形码的序列表示，在所述提供步骤中，两种固体支持物存在于同一分区中。

2.如权利要求1所述的方法，其中在步骤a)和b)之间从所述固体支持物裂解包含条形码的所述固体支持物寡核苷酸。

3.如权利要求1所述的方法，其中步骤b)发生在所述分区内。

4.如权利要求1所述的方法，其进一步包括在步骤b)之后合并所述分区的内容物。

5.如权利要求1所述的方法，其中步骤b)发生在所述分区外。

6.如权利要求1所述的方法，其中步骤b)包括将所述固体支持物寡核苷酸与R2逆转座酶接触。

7.如权利要求1所述的方法，其中步骤b)包括将所述固体支持物寡核苷酸与逆转录酶接触。

8.如权利要求1所述的方法，其进一步包括将双链衔接子添加至所述双链多核苷酸。

9.如权利要求8所述的方法，其中通过将所述双链多核苷酸与载有衔接子的转座酶或标签化酶接触以添加所述双链衔接子。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述第二条形码序列通过单链连接酶添加。

11.如权利要求10所述的方法，其中步骤b)包括将所述固体支持物寡核苷酸与DNA聚合酶接触。

12.如权利要求10所述的方法，其中步骤b)包括将所述固体支持物寡核苷酸与R2逆转座酶接触。

13.如权利要求1所述的方法，其中步骤b)是不依赖模板的。

14.如权利要求1所述的方法，其中所述固体支持物寡核苷酸进一步包含通用引物结合序列。

15.如权利要求1所述的方法，其中所述分区是微孔或乳液中的液滴。

16.如权利要求1所述的方法，其中所述固体支持物寡核苷酸被附接至样品核酸序列。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述样品核酸序列是RNA。

18.如权利要求16所述的方法，其中所述样品核酸序列是mRNA。

19.如权利要求16所述的方法，其中所述样品核酸序列是DNA。

20.如权利要求16所述的方法，其中所述样品核酸序列衍生自单细胞。