[发明专利]AAV介导的枫糖尿症(MSUD)基因疗法

权利要求书

1.一种促进受试者中功能性BCKDHA蛋白表达的方法，所述功能性BCKDHA蛋白是支链α-酮酸(BCAA)脱氢酶复合物的E1-α亚基，所述方法包括向所述受试者施用有效量的包含衣壳的rAAV，其含有经工程化以在所述受试者的肝和/或骨骼肌中表达BCKDHA的核酸，其中所述受试者包含至少一个内源BCKDHA等位基因，所述内源BCKDHA等位基因具有与枫糖尿症(MSUD)相关的功能丧失性突变。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一个内源BCKDHA等位基因包含T-A颠换，导致tyr394至asn(TYR394ASN)。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一个内源BCKDHA等位基因包含剪接位点突变、错义突变、截短突变或无义突变。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述受试者具有两个具有相同功能丧失性突变的内源BCKDHA等位基因(纯合状态)。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述受试者具有两个具有不同功能丧失性突变的内源BCKDHA等位基因(复合杂合状态)。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述内源BCKDHA等位基因包含8个碱基对的缺失(887_894del)。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述内源BCKDHA等位基因包含在外显子7中的895G-A转换，导致gly245至arg(G245R)取代。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述内源BCKDHA等位基因包含1253T-G颠换，导致phe364至cys(F364C)取代。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述内源BCKDHA等位基因包含C至T转换，导致arg220至trp(R220W)取代。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述内源BCKDHA等位基因包含G至A转换，导致gly204至ser(G204S)取代。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述内源BCKDHA等位基因包含C至G颠换，导致thr265至arg(T265R)取代。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述内源BCKDHA等位基因包含在BCKDHA基因中的C至G颠换，导致cys219至trp(C219W)取代。

13.如权利要求1所述的方法，其中所述内源BCKDHA等位基因包含1个碱基对的缺失(117delC)，导致移码并编码仅具有61个残基的截短的蛋白。

14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中施用通过全身注射进行。

15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述衣壳是AAV9衣壳。

16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述核酸经工程化以表达密码子优化的人BCKDHA基因(opti-BCKDHA)。

17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述核酸包含如SEQ ID NO：1-3中任一项所述的序列。

18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述核酸包含一个或多个ITR，其中每个ITR均选自AAV1 ITR、AAV2 ITR、AAV3 ITR、AAV4 ITR、AAV5 ITR和AAV6 ITR。

19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述核酸是自身互补的AAV载体。