[发明专利]包括胞苷类似物的反义RNA编辑寡核苷酸

说明书

本发明涉及单链RNA编辑反义寡核苷酸(AON)，其用于与靶RNA分子结合，使靶RNA分子中存在的至少一个靶腺苷脱氨基并在细胞、优选人细胞中募集ADAR2酶，以使靶RNA分子中的至少一个靶腺苷脱氨基。根据本发明的AON在与靶腺苷相对的位置包括胞苷类似物，其中胞苷类似物在N3位点充当H‑键供体，用于更有效的RNA编辑。

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年6月13日提交的美国临时申请第62/860,843号的优先权，其全部内容并入本文以供参考。

序列表

本申请包含已经以ASCII形式电子提交的序列表，其全部并入本文以供参考。所述ASCII副本创建于2019年6月13日，命名为0032WO01ORD_SeqList_ST25.txt，大小为2,931字节。

技术领域

本发明涉及医药领域。具体地，涉及RNA编辑领域，其中通过单链反义寡核苷酸(AON)靶向细胞中的RNA分子，以特异性地改变靶RNA分子中存在的靶核苷酸。更具体地，本发明涉及RNA-编辑AON，其包括修饰的核苷酸以改善其体内和体外RNA编辑效果。

背景技术

RNA编辑是一个自然过程，通过该过程，真核细胞通常以位点特异性和精确的方式改变其RNA分子的序列，从而将基因组编码的RNA库增加几个数量级。对于整个动植物界的真核物种已经描述了RNA编辑酶，并且这些过程在管理细胞稳态方面从最简单的生命形式(例如秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans))到人的后生动物中都发挥着重要作用。RNA编辑的实例是腺苷(A)到肌苷(I)的转化和胞苷(C)到尿苷(U)的转化，它们分别通过称为作用于RNA的腺苷脱氨酶(ADAR)和APOBEC/AID(作用于RNA的胞苷脱氨酶)而发生。

ADAR是一种多结构域蛋白质，包括一个催化结构域和两到三个双链RNA识别结构域，其取决于所讨论的酶。每个识别结构域识别特定的双链RNA(dsRNA)序列和/或构象。催化结构域也在识别和结合部分dsRNA螺旋方面发挥作用，尽管催化结构域的关键功能是通过核碱基的脱氨基，在靶RNA中附近的、或多或少预定的位置将A转化为I。肌苷被细胞的翻译机制解读为鸟苷，这意味着，如果所编辑的腺苷位于mRNA或前体mRNA的编码区，则它可以编码蛋白质序列。A到I的转化也可能发生在靶mRNA的5’非编码序列中，在原始起始位点上游创建新的翻译起始位点，从而产生N-端延长的蛋白质，或者在3’UTR或转录物的其它非编码部分中，这可能会影响RNA的加工和/或稳定性。此外，A到I的转化可能发生在前体mRNA中的内含子或外显子中的剪接元件中，从而改变剪接模式。其结果，可以包括或跳过外显子。催化腺苷脱氨基的酶属于ADAR酶家族，其包括人脱氨酶hADAR1和hADAR2，以及hADAR3。然而，对于hADAR3，尚未显示脱氨酶活性。