[发明专利]通过靶向体内表观遗传阻遏实现的持久镇痛

权利要求书

1.一种重组基因阻遏物复合物，其包含与转录阻遏物融合且与至少一种指导RNA(gRNA)相关的核酸酶失活的Cas9(dCas9)蛋白，其中所述gRNA与靶核酸序列特异性地杂交，所述靶核酸序列编码选自TRPV1/2/3/4、P2XR3、TRPM8、TRPA1、P23X2、P2RY、BDKRB1/2、Hlr3A、ACCNs、TRPV4、TRPC/P、ACCN1/2、SCN1/3/8A/9A、SCN10A、SCN11A、KCNQ、BDNF、OPRD1/K1/M1、CNR1、GABRs、TNF、PLA2、IL1/6/12/18、COX-2、NTRK1、NGF、GDNF、TNF、LIF、CCL1、CNR2、TLR2/4、P2RX47、CCL2、CX3CR1、BDNF、NR1/2、GR1A1-4、GRC1-5、NK1R、CACNA1A-S和CACNA2D1的基因产物，其中所述基因产物的表达被抑制。

2.权利要求1的重组基因阻遏物复合物，其中所述靶核酸序列位于染色体2上的位置2q24.3。

3.权利要求1或2的重组基因阻遏物复合物，其中所述gRNA包含由11-107中任一个所示的序列编码的序列。

4.权利要求1或2中的任一项的重组基因阻遏物复合物，其中所述gRNA与编码SCN9A产物(Nav1.7)的核酸序列特异性地杂交。

5.权利要求1或2中的任一项的重组基因阻遏物复合物，其中所述转录阻遏物选自：mSin3相互作用结构域(SID)蛋白、甲基-CpG-结合结构域2(MBD2)、MBD3、DNA甲基转移酶(DNMT)1(DNMT1)、DNMT2A、DNMT3A、DNMT3B DNMT3L、视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)、甲基CpG结合蛋白2(Mecp2)、GATA朋友1(Fog1)、MAT2调节剂(ROM2)、拟南芥HD2A蛋白(AtHD2A)、赖氨酸特异性的脱甲基酶1(LSD1)和Krüppel-相关盒(KRAB)。

6.权利要求5的重组基因阻遏物复合物，其中所述转录阻遏物结构域是KRAB结构域。

7.一种多核苷酸，其编码权利要求1的重组基因阻遏物复合物的一种或多种组分。

8.权利要求7的多核苷酸，其中所述多核苷酸是为在人细胞中表达而优化的密码子。

9.一种载体，其包含权利要求7或8的多核苷酸。

10.权利要求9的载体，其中所述多核苷酸可操作地连接至启动子。

11.权利要求10的载体，其中所述启动子选自：人巨细胞病毒(CMV)启动子、CAG启动子、劳斯肉瘤病毒(RSV)LTR启动子/增强子、SV40启动子、EF1-α启动子、CMV立即/早期基因增强子/CBA启动子、Nav1.7启动子、Nav1.8启动子、Nav1.9启动子、TRPV1启动子、突触蛋白启动子、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II启动子、微管蛋白αI启动子、神经元特异性的烯醇化酶启动子和神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)启动子。

12.权利要求9的载体，其中所述载体包含在至少一种指导RNA编码序列上游的polIII启动子。

13.权利要求12的载体，其中所述polIII启动子选自U6和H1启动子。

14.权利要求9的载体，所述载体进一步包含调节性控制序列。

15.权利要求14的载体，其中所述调节性控制序列是土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)。

16.权利要求9的载体，其中所述载体是重组腺相关病毒载体(rAAV载体)。