[发明专利]用于转基因表达的方法和组合物

说明书

本公开内容提供了在细胞中表达转基因的方法、在有此需要的对象中治疗病症的方法以及药物组合物。特别地，该方法包括使细胞(例如患有例如囊性纤维化的病症的对象的细胞)和与AAV转导的增强因子组合的重组腺相关病毒(rAAV)接触，在一个实施方案中，该病毒包含AV.TL65衣壳蛋白和包含转基因的多核苷酸，从而在细胞中表达该转基因。本公开内容还提供了包含与一种或更多种增强因子组合的rAAV的药物组合物，在一个实施方案中，该rAAV包含AV.TL65衣壳蛋白和包含转基因的多核苷酸。

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年4月15日提交的美国申请No.62/833,979、2019年10月25日提交的美国申请No.62/926,317和2020年1月29日提交的美国申请No.62/967,219的申请日权益，其公开内容通过引用并入本文。

政府权利声明

本发明是在由国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的R43HL137583的政府支持下进行的。政府拥有本发明中的某些权利。

背景技术

使用腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)进行基因治疗是新兴的治疗方式，包括用于治疗单基因缺陷。囊性纤维化(cystic fibrosis，CF)是致命的常染色体隐性病症，仅在美国就有至少30,000人受到影响，并且全世界至少有70,000人受到影响。CF患者的平均存活年龄为约40岁。CF是由编码囊性纤维化穿膜传导调节蛋白(cystic fibrosistransmembrane conductance regulator，CFTR)的基因中的突变引起的，CFTR是引导氯离子和碳酸氢根离子穿过上皮细胞膜的通道。受损的CFTR功能导致气道炎症和进行性支气管扩张。由于CF的单基因病因学和患者群体中的多种CFTR突变，基因治疗可能为CF提供普遍的治愈。

人细小病毒家族的成员腺相关病毒(AAV)是非致病性病毒，其复制依赖于辅助病毒。因此，重组AAV(recombinant AAV，rAAV)载体是基因治疗临床前研究和临床试验中最频繁使用的载体之一。事实上，使用rAAV2的CF肺病临床试验表明，病毒基因组相对于其他基因转移剂(例如重组腺病毒)在气道组织中具有良好安全特性和长持久性(如通过活检评估的)二者。然而，基因转移未能在CF患者中改善肺功能，因为未检测到rAAV载体来源的CFTRmRNA的转录。

因此，本领域仍然需要在基于AAV的基因治疗方法中的改进的转基因表达方法。

发明概述

本公开内容尤其提供了在细胞中表达转基因的方法、在有此需要的对象中治疗病症的方法以及药物组合物。在一个方面中，对象是人新生儿。在一个方面中，对象是人青少年。

在一个方面中，本公开内容的特征在于在细胞中表达转基因的方法，该方法包括使细胞与以下接触：(i)重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus，rAAV)，其包含AV.TL65衣壳蛋白或其变体以及包含转基因的多核苷酸；和(ii)AAV转导的增强因子(augmenter)，从而在细胞中表达转基因。在一个实施方案中，变体衣壳蛋白与SEQ ID NO:13具有至少80％氨基酸序列同一性。

在一些实施方案中，增强因子是蛋白酶体调节剂。

在一些实施方案中，蛋白酶体调节剂是蒽环类、蛋白酶体抑制剂、三肽基醛或其组合。

在一些实施方案中，蒽环类是多柔比星、伊达比星、阿柔比星、柔红霉素、表柔比星、戊柔比星、米托蒽醌或其组合。

在一些实施方案中，蒽环类是多柔比星、伊达比星或其组合。

在一些实施方案中，蛋白酶体抑制剂是硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。