[发明专利]生产异胡豆苷苷元和单萜吲哚生物碱的方法

权利要求书

1.一种能够产生异胡豆苷苷元的微生物，所述微生物表达

异胡豆苷-β-葡萄糖苷酶(SGD)，其能够将异胡豆苷转化为异胡豆苷苷元，

其中所述SGD是选自以下的异源SGD：RseSGD(SEQ ID NO:24)、GseSGD(SEQ ID NO:25)、SapSGD(SEQ ID NO:26)、RveSGD(SEQ ID NO:27)、VmiSGD1(SEQ ID NO:47)、AhuSGD(SEQ IDNO:48)、HimSGD2(SEQ ID NO:49)、SinSGD(SEQ ID NO:50)、TelSGD(SEQ ID NO:51)、VunSGD(SEQ ID NO:52)、NsiSGD1(SEQ ID NO:53)、LprSGD(SEQ ID NO:54)、AchSGD1(SEQ ID NO:55)、HsuSGD(SEQ ID NO:56)、MroSGD(SEQ ID NO:57)、RseSGD2(SEQ ID NO:58)、PgrSGD(SEQ ID NO:59)、OpuSGD(SEQ ID NO:60)、HpiSGD(SEQ ID NO:61)、HanSGD1(SEQ ID NO:62)、AchSGD2(SEQ ID NO:63)、HimSGD1(SEQ ID NO:64)、IpeSGD(SEQ ID NO:65)、LsaSGD1(SEQ ID NO:66)或CarSGD(SEQ ID NO:67)，或与其具有至少70％、例如至少80％、例如至少90％、例如至少91％、例如至少92％、例如至少93％、例如至少94％、例如至少95％、例如至少96％、例如至少97％、例如至少98％、例如至少99％、例如100％同一性的其变体，

和/或；

其中所述SGD是嵌合SGD，其中所述嵌合SGD包含具有以下通式的氨基酸序列

D₁-D₂-D₃-D₄

其中D₁是来自第一SGD的第一氨基酸序列，

其中D₂是来自第二SGD的第二氨基酸序列，

其中D₃是包含SEQ ID NO:91或与SEQ ID NO:91具有至少90％同一性的其变体的氨基酸或由所述氨基酸组成的第三氨基酸序列，

其中D₄是第四氨基酸序列，其来自第四SGD或是由SEQ ID NO:92的氨基酸组成的氨基酸序列或是与SEQ ID NO:92具有至少90％同一性的其变体的氨基酸组成的氨基酸序列，

其中，所述第一SGD、第二SGD和第四SGD可以相同或不同，前提是所述第一SGD、第二SGD和第四SGD不都是RseSGD。

2.如权利要求1所述的微生物，其中所述微生物选自细菌、古细菌、酵母、真菌、原生动物、藻类和病毒，优选所述微生物是酵母或细菌，例如酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)或埃希氏大肠杆菌(Escherichia coli)。

3.如前述权利要求中任一项所述的微生物，进一步表达

异胡豆苷合成酶(STR)，其能够将断马钱子苷和色胺转化为异胡豆苷，从而所述微生物能够合成异胡豆苷，

其中所述STR优选是CroSTR或与SEQ ID NO:30具有至少90％、例如至少91％、例如至少92％、例如至少93％、例如至少94％、例如至少95％、例如至少96％、例如至少97％、例如至少98％、例如至少99％、例如100％的同一性的其变体。

4.如前述权利要求中任一项所述的微生物，其中D₁包含对应于SEQ ID NO:24的氨基酸M1至R115的氨基酸序列或由其组成。

5.如前述权利要求中任一项所述的微生物，其中D₂包含对应于SEQ ID NO:24的氨基酸F116至G266的氨基酸序列或由其组成。

6.如前述权利要求中任一项所述的微生物，其中D₄包含SEQ ID NO:92或与SEQ ID NO:92具有至少90％同一性的其变体的氨基酸，或由其组成。