[发明专利]用于DNA和基因编辑的脂质包封的双切割内切核酸酶

权利要求书

1.一种多肽，所述多肽包含SEQ ID NO:14的完整氨基酸序列或其片段，前提条件为所述片段含有Glu¹⁰突变。

2.根据权利要求1所述的多肽，其中，所述多肽是经修饰的RNA引导的核酸酶金黄色葡萄球菌Cas9。

3.一种嵌合核酸酶，所述嵌合核酸酶包含经修饰的I-Tevl核酸酶结构域、接头、RNA引导的核酸酶金黄色葡萄球菌Cas9和引导RNA。

4.一种药学上可接受的制剂，所述制剂包含根据权利要求3所述的嵌合核酸酶、脂质纳米颗粒和其药学上可接受的载体。

5.根据权利要求4所述的制剂，其中，所述脂质纳米颗粒进一步包含外源性供体DNA。

6.根据权利要求5所述的制剂，所述制剂进一步包含引导RNA，其中所述引导RNA使Cas9结构域靶向基因组DNA。

7.一种编辑基因组DNA的方法，所述方法包括将根据权利要求3所述的嵌合核酸酶施用至细胞或生物体的步骤。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述方法不使用病毒载体。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述嵌合核酸酶的所述施用是在体内使用受控剂量进行施用。

10.一种使限定长度的DNA分子缺失的方法，所述方法包括将根据权利要求4所述的制剂递送至细胞或生物体的步骤。

11.一种置换DNA分子中的选定序列的方法，所述方法包括将根据权利要求5所述的制剂递送至细胞或生物体的步骤。

12.根据权利要求7和8所述的方法，其中，所述制剂在体内施用至整个生物体或离体施用至培养物中的分离细胞。

13.根据权利要求7和8所述的方法，其中，所述细胞或生物体选自由以下组成的组：哺乳动物细胞、细菌、昆虫细胞和植物细胞。

14.根据权利要求7所述的方法，其中，所述嵌合核酸酶靶向选定DNA分子上的两个独立靶位点。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述选定DNA分子在一个靶位点处被切割。

16.根据权利要求14所述的方法，其中，所述选定DNA分子在两个靶位点处被切割。

17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述选定DNA分子的片段从所述选定DNA分子被切割。

18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述片段的长度为30至36个核苷酸。

19.根据权利要求4所述的制剂，其中，所述脂质纳米颗粒使用挤出方法制备。

20.根据权利要求19所述的制剂，其中，所述挤出方法产生直径为大约50-500nM的颗粒。

21.根据权利要求20所述的制剂，其中，所述制剂进一步包含赋形剂。

22.根据权利要求21所述的制剂，其中，所述赋形剂选自由以下赋形剂组成的组：聚山梨醇酯、聚磷酸酯、氯化钙、氯化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、磷酸钠、乙二胺四乙酸钠、氯化钾、磷酸钾和淀粉或这些物质的混合物。