[发明专利]用于转化真菌孢子的方法

权利要求书

1.用于将多核苷酸分子引入真菌孢子的方法，其包括使真菌孢子和携带该多核苷酸的磁性纳米粒子的混合物暴露于磁力，例如磁体和/或磁场。

2.根据权利要求1所述的用于将多核苷酸分子引入真菌孢子的方法，其包括以下步骤：

a.将要转移入孢子的多核苷酸分子装载在磁性纳米粒子(MNP)上，和

b.将装载在所述磁性纳米粒子上的所述多核苷酸分子(DNA-MNP)加至所述孢子，和

c.使该混合物暴露于磁力，例如磁体和/或磁场，

d.在所述磁体存在下孵育该混合物，以允许将多核苷酸分子引入所述孢子，

从而将多核苷酸分子引入所述孢子。

权利要求1至2所述的方法，其中孵育步骤中的孢子密度大于10⁵/ml/250ng多核苷酸。

3.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中孵育步骤中每毫升的孢子数为105个或更高，例如10⁶个或更高，优选地10⁷个或更高。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中装载到MNP的多核苷酸为DNA或RNA或核苷酸类似物。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中孢子转化为未萌发或萌发孢子。

6.根据权利要求1至55中任一项所述的方法，其中孢子在转化前的孢子萌发时间在0至2h之间。

7.用于产生转化真菌的方法，其包括权利要求1至6中任一项所述的方法的步骤，以及选择存在所述多核苷酸的真菌孢子和/或真菌细胞，例如，所述多核苷酸整合入所述孢子的基因组。

8.根据权利要求7所述的方法，其中多核苷酸或其片段稳定整合入孢子DNA的基因组。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其包括从真菌孢子生长出真菌。

10.用于将核酸递送至真菌孢子的系统，其包含装载有核酸的磁性纳米粒子。

11.用于用多核苷酸转化真菌孢子的试剂盒，其包含装载有多核苷酸的MNP和用于磁转染孢子的工具。

12.组合物，其包含装载有核酸分子的MNP、真菌孢子和缓冲液。

13.根据权利要求12的组合物，其中对于100ng至500ng多核苷酸，组合物中的孢子密度大于105个/ml。

14.根据权利要求12或13的组合物，其中对于200ng至300ng之间的DNA量的转染，组合物中每毫升的孢子数为105个至107个。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法、系统、试剂盒或组合物，其中多核苷酸是双链或单链核糖核苷酸，例如RNA，例如microRNA、反义RNA或dsRNA，或DNA，例如线性DNA或质粒DNA，和/或核酸类似物。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法、系统、试剂盒或组合物，其中装载至MNP的多核苷酸是质粒DNA或线性DNA。