[发明专利]脑类器官的制造方法

权利要求书

1.一种具有淀粉样斑块的脑类器官的制造方法，包括：

在SMAD抑制剂的存在下由阿尔茨海默病相关基因具有变异的多能干细胞形成胚状体的工序a，

将工序a之后的所述胚状体包埋于细胞外基质并在SMAD抑制剂和糖原合成酶激酶3β即GSK3β抑制剂的存在下进行三维培养，形成类器官的工序b，以及

将工序b之后的所述类器官从所述细胞外基质取出并在培养基中进行搅拌培养的工序c；

在白血病抑制因子即LIF的存在下进行所述工序c的至少一部分。

2.根据权利要求1所述的制造方法，其中，在超过20体积％的氧的存在下进行所述工序c的至少一部分。

3.根据权利要求1或2所述的制造方法，将所述工序c进行100天以上。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的制造方法，其中，在所述工序a之前，进一步包括将所述多能干细胞在小于100ng/mL的成纤维细胞生长因子－2即FGF2的存在下进行培养的工序。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的制造方法，其中，以无饲养物进行所述多能干细胞的培养。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的制造方法，其中，所述阿尔茨海默病相关基因为早老素1即PS1基因、早老素2即PS2基因或β－淀粉样前体蛋白即APP基因。

7.一种脑类器官，具有直径大于20μm的淀粉样斑块。

8.根据权利要求7所述的脑类器官，其中，在脑类器官的截面，每1个所述淀粉样斑块的面积相对于该截面的总面积的比例的平均值为0.1％以上。

9.根据权利要求7或8所述的脑类器官，其中，相对于每1个脑类器官，所述淀粉样斑块的数量为2个以上。

10.根据权利要求7～9中任一项所述的脑类器官，其中，淀粉样蛋白β42的表达量相对于淀粉样蛋白β40的表达量的摩尔比即淀粉样蛋白β42的表达量/淀粉样蛋白β40的表达量为0.15以上。

11.根据权利要求7～10中任一项所述的脑类器官，是通过权利要求1～6中任一项所述的制造方法而制造的。

12.一种阿尔茨海默病的治疗药的筛选方法，包括：

在受试物质的存在下培养权利要求7～10中任一项所述的脑类器官的工序，以及

测定所述脑类器官的淀粉样斑块的大小的工序；

所述淀粉样斑块的大小发生了缩小表示所述受试物质为阿尔茨海默病的治疗药。

13.一种阿尔茨海默病的预防药的筛选方法，包括：

在SMAD抑制剂的存在下由阿尔茨海默病相关基因具有变异的多能干细胞形成胚状体的工序a，

将工序a之后的所述胚状体包埋于细胞外基质并在SMAD抑制剂和GSK3β抑制剂的存在下进行三维培养，形成类器官的工序b，

将工序b之后的所述类器官从所述细胞外基质取出，在培养基中进行搅拌培养，得到脑类器官的工序，并且在受试物质的存在下进行至少一部分的工序c，以及

在将工序c进行100天以上后测定所述脑类器官的淀粉样斑块的大小的工序d；

在工序d中，所述淀粉样斑块的大小与对照相比发生了缩小表示所述受试物质为阿尔茨海默病的预防药。

14.一种阿尔茨海默病的预防药或治疗药的筛选方法，包括：

在SMAD抑制剂的存在下由阿尔茨海默病相关基因具有变异的多能干细胞形成胚状体的工序a，

将工序a之后的所述胚状体包埋于细胞外基质并在SMAD抑制剂和GSK3β抑制剂的存在下进行三维培养，形成类器官的工序b，

将工序b之后的所述类器官从所述细胞外基质取出，在培养基中进行搅拌培养而得到脑类器官的工序，并且在受试物质的存在下进行至少一部分的工序c，以及

对工序c的所述脑类器官的淀粉样蛋白β40和淀粉样蛋白β42的表达量进行定量的工序d’，

在工序d’中，淀粉样蛋白β42的表达量相对于淀粉样蛋白β40的表达量的比与对照相比发生了降低表示所述受试物质为阿尔茨海默病的预防药或治疗药。