[发明专利]工程化乙酸激酶变体酶

说明书

本发明提供了工程化乙酸激酶(AcK)、具有AcK活性的多肽和编码这些酶的多核苷酸、以及载体和包含这些多核苷酸和多肽的宿主细胞。还提供了用于产生AcK酶的方法。本发明还提供了包含AcK酶的组合物以及使用工程化AcK酶的方法。本发明尤其可用于药物化合物的产生。

本申请要求2019年7月2日提交的美国临时专利申请序列第62/869,667号的优先权，该美国临时专利申请出于所有目的通过引用以其整体并入。

发明领域

本发明提供了工程化乙酸激酶(AcK)、具有AcK活性的多肽和编码这些酶的多核苷酸、以及载体和包含这些多核苷酸和多肽的宿主细胞。还提供了用于产生AcK酶的方法。本发明还提供了包含AcK酶的组合物，以及使用工程化AcK酶的方法。本发明尤其可用于药物化合物的产生。

对序列表、表格或计算机程序的引用

序列表的正式副本作为ASCII格式化文本文件经由EFS-Web与说明书同时提交，文件名为“CX2-191WO2_ST25.txt”，创建日期为2020年6月29日，且大小为1,74兆字节。经由EFS-Web提交的序列表为说明书的一部分并且通过引用以其整体并入本文。

发明背景

被称为人类免疫缺陷病毒(HIV)的逆转录病毒是获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病原体，获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是一种复杂的疾病，涉及受影响个体的免疫系统的逐渐破坏以及中枢和外周神经系统的退化。逆转录病毒复制的一个共同特征是通过病毒编码的逆转录酶对病毒RNA基因组进行逆转录，以产生病毒复制所需的HIV序列的DNA拷贝。一些化合物诸如MK-8591是已知的逆转录酶抑制剂，并可用于治疗AIDS和类似疾病。虽然存在已知抑制HIV逆转录酶的一些化合物，但是在本领域中仍然需要能够更有效地抑制这种酶并从而改善对AIDS的效果的另外的化合物。

由于其与用于合成DNA的天然核苷的相似性，核苷类似物诸如MK-8591(Merck)是HIV的逆转录酶的有效抑制剂。逆转录酶与这些类似物的结合通过抑制逆转录酶的前进性性质(progressive nature)来使DNA的合成停滞。酶的停滞导致DNA分子的提前终止，使其无效。然而，通过标准化学合成技术产生核苷类似物可能由于其化学复杂性而具有挑战。

发明概述

本发明提供了工程化乙酸激酶(AcK)、具有AcK活性的多肽和编码这些酶的多核苷酸、以及载体和包含这些多核苷酸和多肽的宿主细胞。还提供了用于产生AcK酶的方法。本发明还提供了包含AcK酶的组合物，以及使用工程化AcK酶的方法。本发明尤其可用于药物化合物的产生。

在一些实施方案中，本发明提供了工程化乙酸激酶，所述工程化乙酸激酶包含与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:12和/或SEQ ID NO:600具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性的多肽序列或其功能片段，其中所述工程化乙酸激酶在所述多肽序列中包含至少一个取代或取代集，并且其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:12和/或SEQ ID NO:600编号。