[发明专利]使用了病毒的循环肿瘤细胞的检测方法

说明书

[问题]检测循环肿瘤细胞的方法的提供。[解决手段]一种检测循环肿瘤细胞的方法，其包含以下的步骤：(a)在红细胞与白细胞的交联剂存在下对血液样品进行密度梯度离心处理而制备除去了血细胞的被检样品的步骤；(b)在步骤(a)中制备的被检样品中，使病毒进行感染的步骤；(c)对步骤(b)中得到的被检样品进行标记的步骤；以及(d)从步骤(c)中得到的被检样品中，检测循环肿瘤细胞的步骤。

技术领域

本发明涉及使用了病毒的循环肿瘤细胞的检测方法。

背景技术

在外周血中循环的癌细胞(Circulating Tumor Cell；CTC)是离开实体肿瘤病灶，与血液一同在体内循环的癌细胞，与以往的肿瘤标记相比，有望成为更锐敏的癌早期诊断生物标记物。

端粒酶是参与细胞的永生化的酶，其在所有的癌细胞中都高度地活化。OBP-401(TelomeScan)是搭载有人类端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子以及GFP基因的基因编辑腺病毒(专利文献1:WO 2006/036004)。并且，使用该OBP-401简便地检测CTC的方法正在被开发(非专利文献1：Kojima T.,et al,J.Clin.Invest.,119；3172,2009)。

在该方法中，由于其感染癌细胞并增殖、而端粒酶活性依赖性地大量表达GFP，因此能够不依赖于细胞表面抗原而捕捉所有类别的“活着的”CTC。例如，即使是以下这样的CTC也能够检测到：发生了上皮间质转化(Epithelia l-Mesenchymal Transition；EMT)而使细胞表面抗原的表达的程度或有无发生了变化的CTC，其无法被以CellSearch^TM为代表的、利用上皮细胞标记的以往的CTC检测法检测到。该EMT-CTC与癌干细胞的关联性强，被认为具有治疗抵抗性且恶性度高(非专利文献2：Science.2013Yu M et al.)，近年来作为重要的生物标记物而受到瞩目。

然而，在使用了OBP-401的CTC检测法中的以往的血液预处理方法中，是将血液中的红细胞溶解后，通过离心分离除去红细胞残渣，由此对CTC进行浓缩的(非专利文献1)。

然而，在用以往的血液预处理方法浓缩CTC后利用OBP-401进行CTC检测的情况下，依然存在以下的问题：虽然对添加至血液中的癌细胞株具有极高的灵敏度，能够以高特异度进行检测，但实际想要从癌患者处采集的血液样品(以下，称为“临床检体”)中检测CTC时，灵敏度以及特异度会降低。

此外，非专利文献3的第4页公开了一般的CTC检测方法中的多种血液预处理方法以及其问题，其公开了：在使用了RosetteSep^TM的血液预处理方法中，由于使用以多个细胞表面蛋白为靶标的抗体混合物，因此会在除去血细胞的同时连CTC一同除去，而使CTC的回收率降低。

此外，在使用了病毒的CTC检测方法中适用的血液预处理方法，特别是，就适宜用于从临床检体中检测CTC的血液预处理方法而言，目前为止还未被发现。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO 2006/036004

非专利文献

非专利文献1：Kojima T.,et al,J.Clin.Invest.,119；3172,2009

非专利文献2：Science.2013Yu M et al.

非专利文献3：Scientific reports.2016 07 19；6；28929

发明内容

本发明所解决的技术问题

如上所述，就使用了病毒的循环肿瘤细胞的检测方法而言，需要开发一种从临床检体中也能够以高灵敏度、高特异度检测CTC的方法。