[发明专利]生长素降解决定子系统的试剂盒及其用途

说明书

一种试剂盒，其为对非植物来源的真核细胞中的靶蛋白降解进行控制的生长素降解决定子系统的试剂盒，所述试剂盒具有：第一核酸，其编码在生长素结合位点具有突变的突变型TIR1家族蛋白；生长素类似物，其与前述突变型TIR1家族蛋白具有亲和性；以及第二核酸，其编码包含至少一部分Aux/IAA家族蛋白并与前述突变型TIR1家族蛋白‑前述生长素类似物复合物具有亲和性的降解标签。

技术领域

本发明涉及生长素降解决定子系统的试剂盒及其用途。具体而言，本发明涉及生长素降解决定子系统的试剂盒、靶蛋白的降解方法、靶蛋白降解诱导剂及细胞。

本申请基于2019年7月16日于日本申请的日本特愿2019-131464号主张优先权，将其内容援引至此。

背景技术

本发明人等进行被称为生长素降解决定子(オーキシンデグロン)系统的蛋白降解控制技术的开发至今(例如参照专利文献1～3)。该系统通过将构成生长素响应性泛素连接酶的TIR1导入酵母、动物细胞等真核生物来源的细胞，调节生长素的添加的有无、时机，从而控制添加了降解标签(植物来源Aux/IAA家族蛋白或其部分蛋白；也称为降解决定子(デグロン))的靶蛋白的降解。

本发明人等所开发的控制靶蛋白的降解的方法(也称为生长素降解决定子法)已在细胞生物学研究中广为使用，也在进行在酵母、线虫、果蝇、斑马鱼等模型生物中的应用。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2008-187958号公报

专利文献2：国际公开第2010/125620号

专利文献3：国际公开第2013/073653号

发明内容

发明要解决的问题

如果利用现有的生长素降解决定子法，则通过添加生长素，可以迅速地将添加了降解标签(降解决定子)的靶蛋白降解。然而，现有的生长素降解决定子法在不添加生长素时也会发生靶蛋白的较弱的降解，因此难以进行严格的表达控制。此外，降解诱导使用100μM以上的较高浓度的生长素，特别是在多细胞动物中生长素自身的毒性影响令人担心。

本发明是鉴于上述情况而做出的，提供可以严格且自由地进行蛋白的降解控制的生长素降解决定子系统的试剂盒、靶蛋白的降解方法、靶蛋白降解诱导剂、细胞及化合物。

用于解决问题的方案

本发明包括以下方案。

本发明包括以下方案。

[1]一种试剂盒，其为控制非植物来源的真核细胞中的目标蛋白的降解的生长素降解决定子系统的试剂盒，所述试剂盒具有：第一核酸，其编码在生长素结合位点具有突变的突变型TIR1家族蛋白；生长素类似物，其与前述突变型TIR1家族蛋白具有亲和性；以及第二核酸，其编码包含至少一部分Aux/IAA家族蛋白并与前述突变型TIR1家族蛋白-前述生长素类似物复合物具有亲和性的降解标签。

[2]根据[1]所述的试剂盒，其还具有第三核酸，所述第三核酸编码连接在前述第二核酸的上游或下游的靶蛋白。

[3]根据[1]或[2]所述的试剂盒，其中，前述突变型TIR1家族蛋白为稻源蛋白。

[4]根据[1]～[3]中的任一项所述的试剂盒，其中，前述突变型TIR1家族蛋白为OsTIR1的第74位的F突变为A、G或S的蛋白。

[5]根据[1]～[4]中的任一项所述的试剂盒，其中，前述生长素类似物为下述通式(I)所示的化合物或其酯。

[化学式1]