[发明专利]在宿主细胞中生产岩藻糖基乳糖

权利要求书

1.通过经基因修饰的细胞生产岩藻糖基乳糖的方法，其包括以下步骤：

-提供能够生产岩藻糖基乳糖的细胞，所述细胞包含至少一种编码岩藻糖基转移酶的核酸序列，所述岩藻糖基转移酶将岩藻糖残基从鸟苷二磷酸岩藻糖(GDP-岩藻糖)供体转移到乳糖受体，从而合成岩藻糖基乳糖，

-所述细胞还包含：i)使岩藻糖基乳糖转运得以进行和/或增强的内源膜蛋白的修饰表达和/或ii)使岩藻糖基乳糖转运得以进行和/或增强的异源膜蛋白的表达，其中所述膜蛋白：i)选自膜蛋白的组，所述膜蛋白包含通过搜索GT10和GT11岩藻糖基转移酶家族的基因组邻域发现的任何一个PFAM结构域，所述GT10和GT11岩藻糖基转移酶家族分别具有如2019年7月4日发布的InterPro 75.0所定义的interpro编号IPR001503和IPR002516，其中所述基因组邻域窗口大小为各岩藻糖基转移酶之前的14个基因和之后的14个基因，并且其中所述膜蛋白不属于SET家族，或ii)选自以下的组：包含SEQ ID NO 204、206、208、210、212、214、216、218的膜蛋白，或者包含SEQ ID NO204、206、208、210、212、214、216、218的膜蛋白中任何一个的功能同源物或功能片段，或者与具有SEQ ID NO 204、206、208、210、212、214、216、218的所述膜蛋白中任何一个具有至少80％序列同一性的序列，

-在允许产生所需岩藻糖基乳糖的条件下在培养基中培养细胞，

-优选地从培养物中分离岩藻糖基乳糖。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述膜蛋白选自以下的组：

a)搬运体；

b)P-P键水解驱动的转运蛋白；

c)β-桶孔蛋白；

d)辅助转运蛋白；

e)推定的转运蛋白；和

f)磷酸转移体驱动的基团易位蛋白。

3.通过经基因修饰的细胞生产岩藻糖基乳糖的方法，其包括以下步骤：

-提供能够生产岩藻糖基乳糖的细胞，所述细胞包含至少一种编码岩藻糖基转移酶的核酸序列，所述岩藻糖基转移酶将岩藻糖残基从GDP-岩藻糖供体转移到乳糖受体，从而合成岩藻糖基乳糖，

-所述细胞还包含：i)使岩藻糖基乳糖转运得以进行和/或增强的内源膜蛋白的修饰表达和/或ii)使岩藻糖基乳糖转运得以进行和/或增强的异源膜蛋白的表达，其中所述膜蛋白选自以下组：

a)搬运体，其中所述膜蛋白不属于SET家族；

b)P-P键水解驱动的转运蛋白；

c)β-桶孔蛋白；

d)辅助转运蛋白；

e)推定的转运蛋白；和

f)磷酸转移体驱动的基团易位蛋白，

-在允许产生所需岩藻糖基乳糖的条件下在培养基中培养所述细胞，

-优选地从培养物中分离岩藻糖基乳糖。

4.根据权利要求2或3中任一项所述的方法，其中所述搬运体选自2019年6月17日发布的由TCDB.org所定义的TCDB类别2.A.1.1、2.A.1.12、2.A.1.15、2.A.1.2、2.A.1.3、2.A.1.36、2.A.1.38、2.A.1.46、2.A.1.68、2.A.1.7、2.A.1.81、2.A.123、2.A.2、2.A.21、2.A.58、2.A.6.3、2.A.66和2.A.7.1的组。

5.根据权利要求2或3中任一项所述的方法，其中所述P-P键水解驱动的转运蛋白选自2019年6月17日发布的由TCDB.org所定义的TCDB类别3.A.1.1、3.A.1.2、3.A.1.10、3.A.1.11和3.A.1.5的组。

6.根据权利要求2或3中任一项所述的方法，其中所述β-桶孔蛋白选自2019年6月17日发布的由TCDB.org所定义的TCDB类别1.B.3.1和1.B.18。

7.根据具体权利要求2或3中任一项所述的方法，其中所述辅助转运蛋白选自2019年6月17日发布的由TCDB.org所定义的TCDB类别8.A.3。